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技術(shù)文章

羥脯氨酸(Hyp)檢測原理說明

閱讀:2544          發(fā)布時間:2015-6-3

               羥脯氨酸(Hyp)檢測原理說明

(               測培養(yǎng)細胞,培養(yǎng)液)



一、原理 羥脯氨酸在氧化劑的作用下所產(chǎn)生的氧化產(chǎn)物與二甲氨基苯甲醛作用呈現(xiàn)紫紅色,

根據(jù)其呈色的深淺可推算出其含量。 二、試劑盒組成與配制:

1、試劑一:粉劑×2 瓶,甲 10ml×2 瓶,乙 20ml×2 瓶,臨用時取粉劑一瓶,先加 甲液混勻 10ml 分溶解(從瓶口向內(nèi)看,*溶解完)。然后再加乙液 20ml 充分混勻。配好后的試劑 4~8冰箱保存。

注意點:粉劑加甲液 10ml 后一定一定要*溶解后才能加乙液。

2、試劑二:液體 60ml×1 瓶,4冰箱避光保存。

3、劑三:粉劑×1 , 60ml×1 瓶,臨用時將粉劑一支加到 60ml 劑中充分溶解, 配好后 4℃避光保存。

4、試劑四:羥脯氨酸標準品 5mg×3 支,4冰箱保存。

準貯備液的配制:測試前將一支標準品用蒸餾水溶解后定溶至 50ml,100μg/ml 標準貯備 液。

2μg/ml 準應(yīng)用液的配制:取 100μg/ml 標準貯備液 0.2ml 蒸餾水定溶至 10ml,配成 2μg/ml

的標準應(yīng)用液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

5、消化液:劑×1 瓶,溶 3ml×1 瓶,4冰箱保存。用前將粉劑倒入溶劑中,并 用溶劑將粉劑瓶洗干凈,現(xiàn)用現(xiàn)配。

*注意:混勻時用雙手小心旋動小瓶,切勿上下顛倒混勻,以免引起大量氣泡。

三、操作步驟:

1、樣本前處理:(血清及體液可直接進行檢測,組織則需制成勻漿后檢測。) 組織塊稱重,放在勻漿管口部,用小剪刀剪碎,加入 9 生理鹽水沖入勻稱管

中,緩上下旋轉(zhuǎn)研磨,每次半分鐘,隔半分鐘,反復(fù) 5 次或者勻漿機,勻漿

10 / 30 ,續(xù) 3~5 ,進行。漿 3500 轉(zhuǎn)/ 10 , 取上清 0.1ml 0.4ml 鹽水,稀釋 2%織勻漿進行測, 0.05ml 10%勻 漿加生理鹽水 0.45ml 制備成 1%勻漿,請做預(yù)試后再確定勻漿濃度。(詳見實驗方法學(xué))。

2、消化




空白管

標準管

測定管

雙蒸水(ml

0.25



2μg/ml 標準應(yīng)用液

ml


0.25


檢測液(ml



0.25

消化液(ml

0.05

0.05

0.05



3、羥脯氨酸測定:


混勻,37℃水浴 3 小時



試劑一(ml

0.5

0.5

0.5


混勻,室溫靜置 10 分鐘



試劑二(ml

0.5

0.5

0.5

混勻,室溫靜置 5 分鐘


試劑三(ml

1.0

1.0

1.0

勻,60℃水 15 鐘,流水冷卻后,3500 轉(zhuǎn)/離心 10 鐘,取上清(注

意不要混入下面沉淀)在 550nm 處,1cm 光徑,蒸餾水調(diào)零,測各管吸光度。

注意:若您的樣本中所含羥脯氨酸過低,可以增加您的樣本取樣量或增加勻漿濃度。

4、蛋白定量。

四、計算與舉例:

1、公式

如需詳細的檢測說明原理,請下載資料,同時我司客服人員,我們會為你提供的產(chǎn)品與技術(shù)服務(wù)

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