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技術(shù)文章

各種Elisa常用方法的優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)對(duì)比

閱讀:2430          發(fā)布時(shí)間:2015-5-20

我們知道,Elisa可分為多種類型測(cè)定,是一種廣泛應(yīng)用在測(cè)定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。 我公司技術(shù)部將各種Elisa常用方法的優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)進(jìn)行對(duì)比,結(jié)果如下:

一、直接法(direct Elisa)

    將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標(biāo)記的一級(jí)抗體,即可測(cè)定抗原總量,此一級(jí)抗體的特異性非常重要。

    1.優(yōu)勢(shì):操作手續(xù)簡(jiǎn)短,因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。

    2.劣勢(shì):試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記,但不是每種抗體都適合做標(biāo)記,費(fèi)用相對(duì)提高。

二、間接法(indirect Elisa)

    此測(cè)定方法與直接法類似,差別在于一級(jí)抗體沒(méi)有酶標(biāo)記,改用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量。

    1.優(yōu)勢(shì):二抗可以加強(qiáng)信號(hào),而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析。不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它zui多的免疫反應(yīng)性。

    2.劣勢(shì):交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。

三、雙抗體夾心法(sandwich Elisa)

    被檢測(cè)的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測(cè)抗體,此抗體可用酶標(biāo)記后直接測(cè)定抗原的量;或不標(biāo)記,再透過(guò)酶標(biāo)記的二級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應(yīng)或競(jìng)爭(zhēng)相同的抗原結(jié)合部位。

    1.優(yōu)勢(shì):高靈敏、高專一性,抗原無(wú)須事先純化。

    2.劣勢(shì):抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。

四、競(jìng)爭(zhēng)法(competitive Elisa)

    樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競(jìng)爭(zhēng)相同的抗體,當(dāng)樣品里的自由抗原越多,就可以結(jié)合越多的抗體,而固定抗原就只能結(jié)合到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清洗步驟,洗去自由抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來(lái)與只有固定抗原的對(duì)照組結(jié)果相比較,根據(jù)呈色差異就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。

    1.優(yōu)勢(shì):可適用比較不純的樣本,而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。

    2.劣勢(shì):整體的敏感性和專一性都較差。

五、ELISA技術(shù):基于細(xì)胞法(cell-based Elisa)

    是一種新的定性蛋白檢測(cè)技術(shù),將細(xì)胞直接在微孔板里培養(yǎng),待檢測(cè)時(shí),不需抽提蛋白和裂解細(xì)胞,便可直接測(cè)量微孔板里蛋白經(jīng)刺激或抑制作用后的變化。

    1.優(yōu)勢(shì):無(wú)需裂解細(xì)胞,所以目標(biāo)蛋白損失zui少,可測(cè)定完整細(xì)胞、黏附細(xì)胞、還有非粘附細(xì)胞。

    2.劣勢(shì):不能測(cè)定抗原量。

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