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恒遠福利！十月總結ELISA工作手冊公布
閱讀：2012 發(fā)布時間：2014-10-29 距離十月終結日期沒剩下幾天了，我公司開展了一個ELISA總結討論會。今天將結果分享給大家，上海恒遠生物福利來了！十月總結ELISA工作手冊公布：
·根據(jù)實驗設計，選擇和訂購合適的ELISA試劑盒。
·根據(jù)實驗目的設計合理的樣品實驗排板，預留標準品，(+)和(-)對照，空白對照位置，樣品位置，所有對照樣品和待測樣品均需要實驗復孔。
·實驗前確認ELISA平臺穩(wěn)定，儀器設備正常工作，試劑耗材足夠實驗需要。
ELISA板包被實驗操作流程
1.碳酸鹽包被緩沖液：50mM碳酸緩沖液，pH 9.6，4℃保存。稱取Na2CO3 0.15 克，NaHCO3 0.293克，蒸餾水溶解，定容至100 ml。
2.包被抗原：
·用50mM的碳酸鹽包被緩沖液(pH 9.6)溶解抗原，稀釋抗原濃度為10-20μg/ml，96孔酶標板每孔加入100μl，4℃放置一個晚上。
·第二天棄去包被液后，PBST洗滌3次，直接后續(xù)實驗或者冰箱保存。
·包被細胞
① 在96孔培養(yǎng)板上接種細胞，2E4 cells/well，37℃放置一個晚上培養(yǎng)。
② 第二天用PBS洗滌培養(yǎng)板2-3次。
③ 每孔加入125μl 10% Formalin(1:10稀釋)，室溫下固定15 min。
④ 用滅菌水洗滌培養(yǎng)板3次，晾干后儲藏在2- 8℃?zhèn)溆谩?nbsp;
結果的判定
嚴格依據(jù)試劑盒提供的陽性判定值(CO)進行結果判定。廠商提供試劑的同時，說明書上列出的CO值是建立在一系列科學試驗及統(tǒng)計研究的基礎上，不應隨意更改。定量測定需要制備標準曲線，根據(jù)標準曲線計算結果。
室間質(zhì)量評價(EQA)
EQA是一種回顧性評價，主要是控制實驗室結果的準確性。其要點是保證同一患者的標本一樣對待室間質(zhì)評物，必須強調(diào)的是EQA結果必須同IQC一并分析，找出原因，改進工作中的不足，同時指導實驗室選擇合適的試劑盒。
綜上所有內(nèi)容，我公司技術人員說：ELISA檢測操作步驟復雜，可能會影響測定結果的因素較多，分布在測定操作的各個步驟中，因此必須加強各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，才能得到準確可靠的檢測結果。