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Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好的原因分析
閱讀：6586 發(fā)布時間：2017-7-7 上周青島農(nóng)業(yè)大學(xué)徐老師在我公司購買了相應(yīng)的抗體自己包被Elisa試劑盒。由于徐老師是位實(shí)驗(yàn)新手，剛剛接觸Elisa實(shí)驗(yàn)，研究大鼠干擾素相關(guān)指標(biāo)的實(shí)驗(yàn)，做完大鼠γ干擾素Elisa實(shí)驗(yàn)后反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線的梯度都不好。剛加完顯色劑的時候梯度還算明顯，但是顯色比較淺，隨著時間延長(大概6、7分鐘)以后梯度就不明顯了。終止反應(yīng)后測得的值梯度就沒有了。
為此，我公司技術(shù)員對Elisa標(biāo)準(zhǔn)曲線做不好的原因做出分析：
1.剛加完顯色劑時梯度明顯：顯色液可能是從高濃度向低濃度孔加的。
2.酶濃度太高，導(dǎo)致zui后顯色結(jié)果都是高的。
3.包被-酶標(biāo)系統(tǒng)不匹配或者酶標(biāo)的非特異反應(yīng)太強(qiáng)，或者酶標(biāo)儀讀數(shù)范圍不夠。
4.樣本中有能夠催化底物的物質(zhì)，沒洗下來。
5.建議：包被、酶標(biāo)重新做梯度，先用較低的濃度把梯度摸索好，然后再優(yōu)化靈敏度，zui后調(diào)出所需的靈敏度、線性范圍
6.有條件的話，可以把酶免的蛋白系統(tǒng)移植到板式化學(xué)發(fā)光上，加完底物三分鐘讀數(shù)。
7.蛋白系統(tǒng)靈敏度夠的話，顯色十分鐘就差不多了。
8.酶是自己標(biāo)的這種情況的，HRP比例不要太高。
問題解決后，徐老師對我公司試劑盒的售后服務(wù)非常滿意，并表示下學(xué)期會有新的實(shí)驗(yàn)課題，直接買我公司的進(jìn)口品牌Elisa試劑盒。非常感謝青島農(nóng)業(yè)大學(xué)徐老師對上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司的支持與信賴。