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出血性大腸桿菌O157:H7檢測試劑盒說明書

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出血性大腸桿菌O157:H7檢測試劑盒說明書

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(一)生化管的使用方法

    本安瓿瓶已在凹頸處有割口,請以瓶子上的藍(lán)點(diǎn)為受力點(diǎn),用手以柔力掰開(注意:如安瓿瓶上沒有藍(lán)點(diǎn)的,則用砂輪在安瓿瓶的凹頸處劃痕,然后再掰開)!本鑒定盒配套的塑料帽已滅菌。所有的安瓿瓶、吸塑架、塑料帽在使用后均高壓滅菌后方可棄去。

(二)出血性大腸桿菌O157:H7生化鑒定盒的詳細(xì)使用方法

    出血性大腸桿菌O157:H7為革蘭氏陰性桿菌,需氧或兼性,有周鞭毛,并有菌毛,不產(chǎn)生芽孢的桿菌。發(fā)酵乳糖,不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵山梨醇。氧化酶陰性。MUG陰性。從分離培養(yǎng)平板上挑取可疑菌苔接種于每種微量生化管內(nèi)。將已接種的生化管套上無菌塑料帽,直立于三折吸塑短架內(nèi),于35-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),結(jié)果觀察見表1。注意:如有特殊的接種方式或培養(yǎng)時間,請?jiān)斠娒糠N生化管附帶的使用說明。

表1

產(chǎn)品名稱

結(jié)果判定

培養(yǎng)時間

(小時)

使用說明

陽性

陰性

山梨醇

黃色

紫色

8-24

 

纖維二糖

棉子糖

蛋白胨水

紅色

不變色

24

培養(yǎng)后加靛基質(zhì)試劑2-3滴,立即觀察結(jié)果。

西蒙氏枸櫞酸鹽

藍(lán)色

不變色

24-48

用接種針挑取新鮮菌苔在斜面上劃“之”字形接種,豎立培育。

鳥、賴氨酸脫羧酶

試驗(yàn)管藍(lán)綠色,

對照管變黃

試驗(yàn)管與對照管均變黃

18-24

每株被檢菌應(yīng)同時接種氨基酸對照管一支,并加滅菌液體石蠟5-8滴覆蓋培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)18-24小時,未見陽性結(jié)果,繼續(xù)培養(yǎng)4天,再做終結(jié)果判定。

半固體瓊脂

擴(kuò)散生長

無擴(kuò)散生長

24—48

用接種針挑取新鮮菌苔穿刺接種,豎立培育。

三糖鐵瓊脂

產(chǎn)酸變黃色,

產(chǎn)硫化氫變黑色

不變色

24

用接種針挑取新鮮菌苔穿刺,穿刺完畢后在斜面上劃“之”字形接種,豎立培育。

葡萄糖磷酸鹽胨水

MR:     紅色

不變色

96

培養(yǎng)后加MR試劑2-3滴,立即觀察結(jié)果。

VP:     紅色

不變色

48

培養(yǎng)后依次加入8滴VP試劑甲液及4滴乙液,混勻,再培養(yǎng)10-20分鐘觀察結(jié)果。

試驗(yàn)項(xiàng)目

結(jié)果判定

山梨醇

陰性或遲緩

纖維二糖

陰性

棉子糖

陽性

蛋白胨水

陽性

西蒙氏枸櫞酸鹽

陰性

鳥氨酸脫羧酶

陽性

賴氨酸脫羧酶

陽性

半固體瓊脂

有動力或無動力

三糖鐵瓊脂

底及斜面呈黃色H2S陰性

葡萄糖磷酸鹽胨水

MR 陽性   VP 陰性

備注:本鑒定盒是按照產(chǎn)品目錄中的品種成份從左到右的順序擺放。

 

(三)出血性大腸桿菌O157:H7的和生化鑒定特征(見表2)

表2  大腸桿菌O157:H7的生化特征

試驗(yàn)項(xiàng)目

結(jié)果判定

山梨醇

陰性或遲緩

纖維二糖

陰性

棉子糖

陽性

蛋白胨水

陽性

西蒙氏枸櫞酸鹽

陰性

鳥氨酸脫羧酶

陽性

賴氨酸脫羧酶

陽性

半固體瓊脂

有動力或無動力

三糖鐵瓊脂

底及斜面呈黃色H2S陰性

葡萄糖磷酸鹽胨水

MR 陽性   VP 陰性

注:“+”  陽性; “—” 陰性        ;“+/-” 陽性或陰性 

凡用于上述方法在被檢食品中分離獲得的純菌落,經(jīng)用抗E.coli O157:H7標(biāo)準(zhǔn)血清或EHEC O157:H7。乳膠凝集試劑測試,呈陽性結(jié)果即可報(bào)告為該食品試樣中檢出腸出血性大腸桿菌O157:H7。

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