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2012-6-4 閱讀(1306)
食品安全國家標準
嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測定
1 范圍
本標準規(guī)定了嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測定方法。
本標準適用于嬰幼兒食品和乳品中反式脂肪酸的測定。
2 規(guī)范性引用文件
本標準中引用的文件對于本標準的應用是*的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注日期的引用文件，其版本（包括所有的修改單）適用于本標準。
3 原理
試樣中的脂肪用溶劑提取。提取物在堿性條件下與甲醇反應生成脂肪酸甲酯，用配有氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀分離順式脂肪酸甲酯和反式脂肪酸甲酯，外標法定量。
4 試劑和材料
除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。
4.1 石油醚：沸程 30 ℃～60 ℃。
4.2 乙 mi（C4H10O ）。
4.3 乙 chun（C2H6O ）：體積分數為95 % 。
4.4 正己烷（C6H14 ）：色譜純。
4.5 氨水（NH3·H2O ）：25 %～28 % 。
4.6 氫氧化鉀（KOH ）。
4.7 甲醇（CH4O ）。
4.8 淀粉酶：活力單位：1.5 U/mg，根據活力單位大小調整用量。
4.9 無水硫酸鈉（Na2 SO4 ）。
4.10 氫氧化鉀- 甲醇溶液（4 mol/L ）：稱取26.4 g 氫氧化鉀，溶于約 80 mL 甲醇中。冷卻至室溫，用甲醇定容至 100 mL，加入約 5g 無水硫酸鈉（4.9 ），充分攪拌后過濾，保留濾液。
4.11 脂肪酸甲酯標準品：十八酸甲酯（C18:0 ）、反-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9t ）、順-9-十八碳一烯酸甲酯（C18:1-9c ）、反-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9t，12t）、順-9，12-十八碳二烯酸甲酯（C18:2-9c，12c），放入冰箱在-15 ℃以下保存。
4.12 反式脂肪酸甲酯標準貯備液：濃度分別為 10.0 mg/ mL。稱取500 mg （到0.1 mg ）反-9-十八碳一烯酸甲酯標準品和反-9，12-十八碳二烯酸甲酯標準品，分別用正己烷溶解并定容至 50.0 mL 。放入冰箱在-15 ℃以下保存。
4.13 反式脂肪酸甲酯標準中間液：濃度分別為 1.0 mg/ mL。分別吸取兩種反式脂肪酸甲酯標準儲備液（4.12 ）10.0 mL 入同一 100 mL 容量瓶中并用正己烷（4.4 ）定容。臨用前配制。亦作為標準曲線zui高點。
4.14 反式脂肪酸甲酯標準工作液：臨用前配制。分別吸取反式脂肪酸甲酯標準中間液（4.13 ），0、2.0 、4.0 、6.0、8.0、10.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，用正己烷定容，此濃度即為 0、0.2、0.4、0.6、0.8 、1.0 mg/mL 的標準工作液。
4.15 脂肪酸甲酯標準混合液：將脂肪酸甲酯標準品（4.11 ），用正己烷配制成脂肪酸甲酯標準混合溶液，其中每種成分的濃度約為 0.05 mg/mL 至 0.5 mg/mL 。用于進行順反脂肪酸甲酯分離程度及定性的鑒定。
4.16 剛果紅溶液：稱取 1 g 剛果紅溶解稀釋至 100 mL。
5 儀器和設備
5.1 氣相色譜儀，帶氫火焰離子化檢測器。
5.2 旋轉蒸發(fā)器。
5.3 恒溫水浴：40 ℃～80 ℃。
5.4 渦旋振蕩器。
5.5 離心機：轉速≥4000 轉/分鐘。
5.6 毛氏抽脂瓶。
5.7 毛氏抽脂瓶搖混器。
5.8 脂肪收集瓶：圓底燒瓶，與旋轉蒸發(fā)儀配套。
5.9 天平：感量為 0.1 mg 。
6 分析步驟
6.1 試樣處理
6.1.1 含淀粉的試樣：稱取混合均勻的固體試樣約 1.5 g，液體試樣約 5 g（到0.1 mg ）于毛氏抽脂瓶中，加入約 0.1 g 淀粉酶（酶活力 1.5 U/mg），混合均勻后，加入 8 mL～10 mL 45 ℃±2 ℃的水搖勻。蓋上瓶塞置于 55 ℃±2 ℃水?。?.3 ）中2 h ，每隔 10min 搖混一次。加入兩滴約 0.1 mol/L 的碘溶液，檢驗淀粉是否水解*。若無藍色出現(xiàn)，則水解*，否則將毛氏抽脂瓶重新置于水浴中，直至藍色消失，取出冷卻至室溫。
6.1.2 不含淀粉的試樣：稱取混合均勻的固體試樣約 1.5 g，液體試樣約 10g （到0.1 mg ）于毛氏抽脂瓶（5.6 ）中，加入 10 mL 45 ℃±2 ℃的水，將試樣洗入毛氏抽脂瓶（5.6 ）的小球中，充分混合，直到試樣*散開，冷卻至室溫。
6.1.3 脂肪的提?。合蛎铣橹浚?.6 ）中加入3.0 mL 氨水（4.5 ），混勻。置于60 ℃±2 ℃水?。?.3 ）中 15 min～20 min ，冷卻至室溫。加入 10 mL 乙chun（4.3 ）和 1 滴剛果紅溶液（4.16 ），混勻。再加入25mL 乙mi（4.2 ），塞上軟木塞，放到毛氏抽脂瓶（5.6 ）搖混器上震蕩 1 min，也可采用手動振搖方式，再加入 25mL 石油醚 （4.1 ），震蕩 1 min，不低于 4000 轉/分鐘離心分層。傾出上清液于脂肪收集瓶 （5.8 ）中，為*次提取。在剩余試樣液中再加入 5 mL 乙chun，25 mL 乙mi，25 mL 石油mi按上述操作步驟進行第二次提取。用離心機（5.5 ）離心分層后傾出上清液與*次的上清液合并。將脂肪收集瓶（5.8 ）置于旋轉蒸發(fā)器（5.2 ）上，在60 ℃±2 ℃通入氮氣條件下旋轉蒸發(fā)除去溶劑，保留殘渣，即為脂肪。
6.1.4 脂肪酸甲酯的制備：將上述脂肪用正己烷（4.4 ）溶解并定容至 10.0 mL，取出 3.0 mL 于 10 mL具塞試管中，加入 0.3 mL 氫氧化鉀- 甲醇溶液（4.10 ）。蓋緊瓶蓋，渦旋振蕩器（5.4 ）上劇烈振搖2 min ，4000 轉/分鐘離心 5 min 后將上清液轉入氣相色譜試樣瓶中，此為試樣測定液。
6.2 測定
6.2.1 參考色譜條件
色譜柱：填料為氰丙基芳基聚硅氧烷的毛細管柱，柱長100 m，內徑0.25 mm，膜厚0.2 µm；或同等性能的色譜柱。
進樣口溫度：250 ℃；載氣（Ｎ2）。
檢測器溫度：300 ℃。
分流比：10：1。
進樣量：1.0 μL 。
上海凱朗儀器設備廠主要生產：生化培養(yǎng)箱,霉菌培養(yǎng)箱,光照培養(yǎng)箱,人工氣候箱,恒溫恒濕,低溫生化培養(yǎng)箱,恒溫培養(yǎng)振蕩器（搖床）系列及光照恒溫培養(yǎng)搖床系列和高低溫試驗箱，高低溫恒定濕熱試驗箱，高低溫交變濕熱試驗箱，高低溫沖擊試驗箱，溫度快速變化試驗箱，鹽霧腐蝕試驗箱，老化試驗箱，真空、鼓風、高溫干燥箱等各種環(huán)境類試驗設備。
