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DNA限止性內(nèi)切酶克化注意事情要點(diǎn)
1 .凡用在酶切反響中的一切分子化合物塑料盛器（Eppendorf 管,Tip 頭等）,真空干燥箱都要新的,zui終用重蒸水清洗,濕熱滅菌,置 50 ℃溫箱中烘焙,運(yùn)用前敞開(kāi)包裝,用小鑷子夾取,不直接用手去拿,嚴(yán)密防備手里雜酶污染。
2 .分子克隆是微量操作技術(shù),DNA 樣品與限止性內(nèi)切酶的用量都,務(wù)必嚴(yán)明注意吸樣量的正確性及所有放入反響整體體系中電熱恒溫培養(yǎng)箱。
3 .要注意酶切時(shí)加樣的次第,普通次第為水、緩和沖突液、DNA 各項(xiàng)試藥,zui終才加酶液。取液時(shí),Tip 頭要從溶液外表汲取,以避免 Tip 頭沾去過(guò)多的液體與酶,待用的內(nèi)切酶要放在冰浴內(nèi),用后蓋緊蓋子,迅即放回 -20 ℃冰箱,避免限止性內(nèi)切酶的失活 培養(yǎng)箱。
4 .當(dāng)樣品在 37 ℃與 65 ℃保暖時(shí),要注意:
（l ）避免因蓋子未蓋嚴(yán)緊使水汽進(jìn)入了管內(nèi),使反響溶液大小數(shù)量多增加,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)敗績(jī)。
（2 ）避免因?yàn)闃?biāo)簽剝離,分不zui后校樣種類型。
5 .因?yàn)闇夭疃擞?往往在蓋上有水汽,因?yàn)檫@個(gè)樣品酶切完結(jié)或半中腰抽樣電泳要離心 2 秒鐘,以集中大小內(nèi)溶液,否則會(huì)發(fā)覺(jué)酶切后大小 少了。
