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2012-2-6 閱讀(1397)
Southern Blot法
Southern Blot是一種常用的DNA定量的分子生物科學(xué)辦法。
其原理是將待測的 DNA 樣品固定在固相載體(硝鏹水纖維膜或錦綸膜)上，與標(biāo)記的核酸探針施行雜交，在與探針有同源序列的固相 DNA 的位置上顯露出雜交信號，經(jīng)過檢驗(yàn)測定信號的有無、強(qiáng)弱可以對樣品定性、定量，因此計(jì)算出轉(zhuǎn)入的復(fù)印數(shù)。Southern法正確性高、特別優(yōu)異性強(qiáng)，但存在消耗時(shí)間費(fèi)勁的欠缺。這里經(jīng)常使用實(shí)驗(yàn)室器具干燥箱KLYQ、培養(yǎng)箱KLYQ、恒溫?fù)u床KLYQ。
額外，因?yàn)?span style="font-family: Times New Roman">Southern法檢驗(yàn)測定不通過靶斷片的擴(kuò)增(PCR)，普通每個(gè)電泳通道需求10-30 μg的DNA ，在實(shí)際操作中就需求較數(shù)量多的植物材料來提出取得DNA ，而轉(zhuǎn)基因植物的愈傷團(tuán)體在無菌條件下通過用篩子選、從新派生后普通都比較細(xì)弱，不適宜數(shù)量多抽樣。假如外源基因在插合乎時(shí)尚發(fā)生基因重組，導(dǎo)致限止性酶切位點(diǎn)遺失，Southern 法也沒有辦法檢驗(yàn)測定到。這些個(gè)因素都抑制了Southern法在T0代植物中檢驗(yàn)測定外源基因復(fù)印數(shù)的應(yīng)用電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、真空干燥箱、干燥箱KLYQ。
