斑點ELISA法

斑點酶聯(lián)免疫吸附試驗（Dot-ELISA）又稱點免疫結(jié)合法（Dot-immunobinding）或抗原斑點試驗（Antigen spot test,AST）,為Hawkes等參照核酶的斑點雜交法改良而成，是以纖維素膜為載體的一種新型免疫檢測技術(shù)【6】。據(jù)報道，其敏感性及特異性高于或相當于常規(guī)ELISA及放射免疫測定，已被廣泛應用于免疫印漬（Immunobloting）單克隆抗體鑒定及各種抗原-抗體體系的檢測。

Dot-ELISA以纖維素膜代替常規(guī)ELISA中常用的聚苯乙烯酶標板，這種微孔濾膜對樣品吸附量大，且包被牢固，所以樣品用量少，試驗結(jié)果可通過顏色斑點的出現(xiàn)與否和色澤進行判定，不需特殊儀器。常規(guī)ELISA中的直接法、間接法、夾心法等均適合用于Dot-ELISA.其試驗程序與常規(guī)ELISA相似，加抗原或抗體與膜上，封閉、洗滌，然后加入其他試劑進行免疫反應、底物顯色反應，zui后肉眼觀察出現(xiàn)斑點情況做出判斷。在現(xiàn)有的Dot-ELISA試驗研究中，有的是將抗原（抗體）包被好的膜或在包被之前用圓形打孔器壓跡或用筆畫成幾毫米的小方塊，包被、封閉之后剪開，分別放入聚苯乙烯酶標板的小孔中，然后再加各種試劑，有的采用完整膜的形式，預先在膜上畫格并做好標記。包被之后，將膜放入濕盒或平皿中，加入各種試劑或者直接將包被好的膜浸入到各種試劑中反應。包被、封閉好的膜可在4℃保持一段時間。Dot-ELISA簡便、快速、經(jīng)濟、敏感、特異的特點深受人們歡迎，從而得到廣泛應用。