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如何解決色譜柱使用過程出現(xiàn)的問題

閱讀：3600      發(fā)布時間：2014-12-29
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 問題:                                      
不同色譜柱間差異  
使用期間柱變化  
原因:    
填料、鍵合相不同  
柱床破壞  
鍵合相丟失  
硅膠基質(zhì)溶解  
強保留組分堆積堵塞  
表現(xiàn):  
保留因子(k)，分離因子(α)  
柱效(N)  
保留因子(k)，分離因子(α)  
柱效(N)  
保留因子(k)，柱效(N)  
問題:   
柱外效應(yīng)  
原因:  
系統(tǒng)差異、進樣量大、進樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。   
表現(xiàn):  
柱效（N)  
問題:  
分離效果變差   
原因:  
流動相組分改變  
流速改變  
溫度改變  
表現(xiàn):  
保留因子(k)，柱效變化很小  
保留因子(k)，分離因子（α）  
保留因子(k)，柱效變化很小  
問題:  
柱平衡慢  
原因:  
重新平衡時間不夠   
柱超載 樣品量太大   
表現(xiàn):  
保留因子(k)，柱效變化很小  
保留因子(k)，柱效(N)  
造成色譜峰（ 不對稱）拖尾的原因  
1．色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷；  
2．柱頭有污染；  
3．樣品超載；  
4．樣品溶劑不合適；  
5．柱外效應(yīng)；  
6．化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng)；  
7． 緩沖容量不足或不合適；  
8． 重金屬污染。  
如何解決峰形拖尾的問題  
A. 與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題  
1．流動相中，加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物）， 未知化合物加醋酸三乙胺；  
2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；  
3.降低進樣量至<1μg。  
B. 與色譜柱有關(guān)的拖尾問題  
1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗；  
2.使用保護柱。  
C. 與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬  
1.進樣體積過大，（通常≤25μL）；  
2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（*連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007"）；  
3.檢測器流通池的體積過大。

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