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快速蛋白液相色譜(FPLC)、中壓液相色譜(MPLC)、低壓液相色譜(LPLC)是近年來從HPLC基礎(chǔ)上發(fā)展的新型色譜技術(shù),其中FPLC能以極快的速度把復(fù)雜混合物分離,可在短時間內(nèi)大量純化樣品,具有柱容量大、回收效率高及生物大分子不易失活等特性,在生命科學(xué)研究及藥物生產(chǎn)上使用越來越廣泛。
(1)FPLC與HPLC相同的是:都采用輸液泵、高靈敏檢測器、梯度洗脫裝置、自動收集裝置和計算機控制等設(shè)備,均具有快速、分辨率高、分離效能高等特點。
(2)FPLC與HPLC不同的是:HPLC的管道系統(tǒng)多采用金屬材料,流動相由往復(fù)泵或隔膜泵驅(qū)動,使用高壓,色譜柱內(nèi)徑小,分析精度高,大流速通常不超過20 mL/min(有些制備級HPLC可達300 mL/min),有時需使用一定濃度的有機溶劑,適用于微量樣本檢測或少量純化制備;FPLC的管道系統(tǒng)是由耐高壓的塑料管組成,流動相多由柱塞式泵驅(qū)動,中低壓,所用色譜柱內(nèi)徑大,流速范圍0~100 mL/min(大流速可達1 000 mL/min),分析精度沒有HPLC高,只使用常規(guī)無機鹽溶液,適于大規(guī)模純化樣品。
(3)應(yīng)用范圍:HPLC可分析低沸點低相對分子質(zhì)量分子、高沸點中分子、高分子有機化合物(包括極性、非極性)、離子型無機化合物、熱不穩(wěn)定生物分子;FPLC專門用于蛋白質(zhì)、多肽及多核苷酸的分離純化。
高壓制備系統(tǒng)(HPLC)可以涵蓋FPLC的功能,但是在高鹽的實驗環(huán)境下,泵的選擇就需要非常謹(jǐn)慎,隔膜泵會是一個不錯的選擇。常規(guī)來說流速超過3升以上的部分,PTFE、PFA、玻璃等材質(zhì)就不適合了,還是會需要選擇不銹鋼等材質(zhì)。對于FPLC在系統(tǒng)配置上的選型和生物液相又有所區(qū)別,很多PH、電導(dǎo)等檢測器就無需再配置,而且FPLC所涉及的填料內(nèi)徑較大,柱管的大小選擇,流動相的流速選擇對于整體方案的影響也會比較大。
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