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"T4 DNA连接酶
别名：T4 DNA Ligase
规格：BR，1u/ul,带PEG
包装：LC200u
货号：YY10594
CAS号：
保存条件：

产品详细资料如下：

英文名称：T4 DNA Ligase
CAS号：9015-85-4
分子量：55.3kDa，单体
来源：含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌
浓度：1u/ul（200CEU/ul）
活性定义：是指在ATP-PPi交换反应中，37℃、30分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量（weiss单位，1个weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。1个粘性末端连接单位：20ul反应体系（50mM Tris-HCL（PH7.5）, 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM（300ug/ml）的5-DNA末端）中，在16℃、30分钟内连接50%连接HindIII酶切的Lambda DNA 产物所需的酶量）
酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL（PH7.6）, 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液组分：20mM Tris-HCL（PH7.5）, 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%（v/v）甘油
10×T4 DNA Ligase缓冲液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP（PH7.5,25℃）
50% PEG溶液：50%（w/v）聚乙二醇4000
抑制剂：当反应体系中NaC1或KC1的浓度超过200 mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加热10分钟或70℃加热5分钟
注意：聚乙二醇（PEG）可极大地增加平末端DNA的连接效率，PEG4000在反应体系中的推荐浓度为5%（w/v）；T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率，为避免此现象，电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理如下：样本与Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加热5分钟或65℃加热10分钟后冰浴保存；转化时，连接产物的体积不得超过感受态细胞体积中的10%；电转化之前，先用氯仿抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase，然后经乙醇沉淀纯化抽提产物
质量控制：测试表明无内切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能检测：粘性末端或平末端DNA的连接能力
性状：液体。该酶催化双链DNA或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'-羟基末端之间形成磷酸二酯键，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA的粘性和平末端，但该酶对单链核酸无酶活性。该酶需要辅因子ATP
用途：科研、实验。粘性末端或平末端双链DNA的连接；双链寡核苷酸接头与双链DNA连接；双链DNA、RNA或DNA-RNA复合体中缺口的修复；连接酶介导的RNA检测；位点特异性突变；扩增片段长度多态性
贮存条件： -20°C贮存

相关试剂如下：
T4 DNA连接酶/T4 DNA Ligase/ BR，5u/ul,带PEG 200u
T4 DNA连接酶/T4 DNA Ligase/ BR，30u/ul HC1000u
末端转移酶/TDT/9027-67-2 BR，20u/ul 500U
5´-核苷酸酶/5′-NT/9027-73-0 BR，200u/mg 100U
5-溴-4氯-3-吲哚N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/X-GalNAc/129572-48-1 超纯，98% 25毫克
对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷/PNPG/3767-28-0 生物技术级，99% 1克
邻硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷/ONPG/19887-85-5 BR，98% 1克
n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷/OGP/29836-26-8 试剂级，98% 250毫克
对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/4-Nitrophenyl N-acetyl-β-D-galactosaminide/14948-96-0 BR，98% 250毫克
复合蛋白酶/Compound proteinase/ BR，120u/mg 5克
谷氨酰胺转移酶/TG/80146-85-6 BR，1.5u/mg 2U

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