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上海源葉生物科技有限公司
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基于細(xì)胞物理性狀的免疫細(xì)胞分離方法
2012-4-7 閱讀(1074)
1、根據(jù)各種細(xì)胞比重的差異
（1）自然沉降法
（2）密度梯度離心法
①Ficoll-Hypaque密度梯度離心法：人外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞，其體積、形狀和比重與其他細(xì)胞不同，紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞比重較大，為1.092左右，而淋巴細(xì)胞和單個核細(xì)胞比重為1.075左右。利用密度在1.077±0.001g/L之間近于等滲的Ficoll-Hypaque混合溶液（稱為淋巴細(xì)胞分層液）作密度梯度離心時,各種血液成分將按密度梯度重新分布聚集。血漿和血小板由于密度較低,故懸浮于分層液的上部；紅細(xì)胞與粒細(xì)胞由于密度較大,故沉于分層液的底部；PBMC密度稍低于分層液,故位于分層液界面上,這樣就可獲得PBMC。
②Percoll密度梯度離心法：Percoll是Pharmacia公司的商品名，成分為硅化聚乙烯吡咯烷酮（PVP），為無毒，無刺激的新型密度梯度離心分離劑。聚乙烯吡咯酮包被的硅膠混懸液，它具有易成等滲、粘度低、無毒性、不引起細(xì)胞聚集等優(yōu)點(diǎn)，已得到廣泛引用。由于Percoll在培養(yǎng)基中顆粒大小不等，其在離心過程中自然形成密度梯度，從而將不同密度的細(xì)胞分離出來。將1份10×PBS與9份percoll儲存液混合，制成等滲Percoll懸液，此懸液被認(rèn)為是100 % Percoll懸液，其密度為1.1294g/ml,可通過用PBS（1x）或組織培養(yǎng)液稀釋此100%Percoll而獲得適宜密度進(jìn)行細(xì)胞分離，因?yàn)橄♂尪扰c密度線性相關(guān)，常用的密度如下：
70% Percoll 1.090g/ml
60% Percoll 1.077g/ml
50% Percoll 1.067g/ml
40% Percoll 1.056g/ml
30% Percoll 1.043g/ml
20% Percoll 1.031g/ml
（3）改變細(xì)胞密度法
巨噬細(xì)胞能夠吞噬鐵粉，增加其比重，通過密度梯度離心或磁場將其分離；T細(xì)胞能夠與綿羊紅細(xì)胞形成花環(huán)，形成的花環(huán)復(fù)合物比重大，借助密度梯度離心將T細(xì)胞分離。
2、根據(jù)細(xì)胞粘附特性
巨噬細(xì)胞能夠非特異性粘附于玻璃或塑料表面，根據(jù)這種特性可以將巨噬細(xì)胞從混合細(xì)胞群體中分離；B細(xì)胞能夠粘附于尼龍棉上，通過尼龍棉柱時被阻滯，從而將其與其他細(xì)胞分開。
3、根據(jù)細(xì)胞對滲透壓變化的敏感度
例如紅細(xì)胞對低滲敏感，通過低滲處理能夠裂解紅細(xì)胞。
