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中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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上皮細(xì)胞的培養(yǎng)

時(shí)間:2012-7-19閱讀:1554
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上皮細(xì)胞培養(yǎng)

1)表皮細(xì)胞培養(yǎng)

1.取材:取外科植皮或手術(shù)殘余皮膚小塊,以角化層薄者為佳,早產(chǎn)流產(chǎn)兒皮
膚更好,切成0.5~1平方厘米小塊。

2.EDTA處理:先置入0.02%EDTA中室溫置5分鐘。

3.冷消化:換入0.25%胰蛋白酶中,置4℃過夜。

4.分離:取出皮膚,用血管鉗或鑷子把表皮與層分開。

5.溫消化:取出表皮單獨(dú)處理,用剪刀剪成更小的塊后,置入新的0.25%胰蛋
白酶中,37℃再消化30~60分鐘。

6.用吸管輕輕反復(fù)吹打,使成細(xì)胞懸液。

7.培養(yǎng)液:通過80目不銹鋼紗網(wǎng)濾過后,低速離心,吸上清,直接加入Eagle
液和20%小牛血清,制成細(xì)胞懸液,接種入碟皿中,CO溫箱培養(yǎng)。2

2) 乳腺組織培養(yǎng)

直接培養(yǎng)法:(適于培養(yǎng)含纖維少的軟組織)

1.在含有少量培養(yǎng)液或Hanks液的容器中,用鋒利刀片將組織反復(fù)切割成碎塊。

2.把組織碎塊連同液體注入離心管中,再補(bǔ)加少許培養(yǎng)液,用吸管吹打片刻,
置試管架3~5分鐘。吸除上層液可排除非乳腺細(xì)胞部分。重復(fù)2~3次。

3.末次處理結(jié)束后,向沉降管中再補(bǔ)加培養(yǎng)液,用吸管稍吹打,使沉降物重懸。
不待細(xì)胞團(tuán)塊下降立即通過3~4層無菌紗布濾入另管中。

4.調(diào)整好適宜密度,接種入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

膠原酶消化法:(適于處理含纖維多的較硬組織)

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