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上海一基實(shí)業(yè)有限公司

中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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產(chǎn)品分類品牌分類

生化試劑: 細(xì)胞試劑盒高純?cè)噭?/a> 標(biāo)準(zhǔn)品類氨基酸酶類蛋白質(zhì)類抗生素類植物激素及核酸類碳水化合物類色素類維生素類分離材料及耗材表面活性劑緩沖劑類培養(yǎng)基類測(cè)試盒類其他生化試劑

電熱套

分析檢測(cè)儀器: 分析檢測(cè)儀器

萬(wàn)用可調(diào)電爐/封閉式電爐: 雙聯(lián)封閉電爐

混合器系列: 混合器

電阻爐系列: 電阻爐系列

蒸餾水器系列: 蒸餾水器

電熱板系列: 不銹鋼加熱平臺(tái)

勻漿機(jī)系列: 勻漿機(jī)

離心機(jī)系列: 臺(tái)式高速離心機(jī)

* 振蕩器系列: 旋渦混合器

培養(yǎng)箱系列: 智能培養(yǎng)箱

磁力攪拌器: 磁力攪拌器

超聲波清洗機(jī): 超聲波清洗機(jī) 超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)

干燥箱: 紅外線快速干燥箱真空干燥箱

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器: 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52A

糖度計(jì)，折光儀: 糖度計(jì)，折光儀，折射儀

冷凍干燥機(jī): 冷凍干燥機(jī)

層析冷柜: 雪花制冰機(jī)

低溫恒溫槽: 低溫恒溫槽超級(jí)恒溫水槽.恒溫油槽恒溫液循環(huán)泵（機(jī)）高精度低溫恒溫槽高精度恒溫水槽.恒溫油槽低溫恒溫循環(huán)器高溫循環(huán)器高溫恒溫油浴 DF-101S型集熱式磁力攪拌器

熱銷產(chǎn)品: 化學(xué)試劑

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魚(yú)類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）使用說(shuō)明書(shū)

時(shí)間：2011/5/13閱讀：1806

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魚(yú)類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）

使用說(shuō)明書(shū)

【試劑盒名稱】

魚(yú)類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）

【試劑盒用途】

定量檢測(cè)魚(yú)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）的含量。

【檢測(cè)原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被魚(yú)類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中魚(yú)類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）濃度呈正相關(guān)，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中魚(yú)類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-1（IGFBP-1）含量。

【試劑盒組成】

1	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	7	顯色劑A液	6mL
2	標(biāo)準(zhǔn)品	0.3mL×6管	8	顯色劑B液	6mL
3	20倍濃縮洗滌液	25mL	9	終止液	6mL
4	樣本稀釋液	6mL	10	說(shuō)明書(shū)	1份
5	特殊稀釋液	6mL	11	封板膜	2張
6	酶標(biāo)試劑	6mL	12	密封袋	1個(gè)

備注：標(biāo)準(zhǔn)品（1號(hào)→6號(hào)）濃度依次為：80、40、20、10、5、2.5 μg/L.

【需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

2、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

3、精密移液器及一次性吸頭

5、一次性試管

【操作步驟】

1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對(duì)照孔不加。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板）。

6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加。

7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板）。

9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min。

10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）。

12、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

【樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃），因?yàn)?/span>疊氮鈉（NaN₃）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。

【注意事項(xiàng)】

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

2、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。

4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。

5、本試劑盒定量范圍為2.5-80μg/L，超過(guò)此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果（2.5-80μg/L范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6、若顯色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。

7、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號(hào)的試劑不得混用。

9、底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

【操作程序總結(jié)】

準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘

洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計(jì)算

【檢測(cè)范圍】

2.5μg/L - 80μg/L

【規(guī)格】

【貯藏】

2-8℃，避光防潮保存。

【有效期】



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