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大鼠肿瘤坏死因子α（TNF-α）说明书
阅读：806 发布时间：2012-3-14大鼠肿瘤坏死因子 α （ TNF- TNF- TNF- TNF- α ） 酶联免疫 分析
试剂 盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T 96T 96T 96T
10ng/L-360ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定 大鼠血清、血浆及相关液体样本中 小鼠肿瘤坏死因子 α （ TNF- α ）
含量 。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 大鼠肿瘤坏死因子 α （ TNF- α ） 水平。用纯化
的 大鼠肿瘤坏死因子 α （ TNF- α ） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中
依次加入 肿瘤坏死因子 α （ TNF- α ） ， 再与 HRP 标记的 肿瘤坏死因子 α （ TNF- α ） 抗体结
合，形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物 ，经过*洗涤后 加 底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶
的催化下转化成蓝色 ， 并在酸的作用下转化成zui终的黄色 。 颜色的深浅和样品中的 肿瘤坏死
因子 α （ TNF- α ） 呈正相关 。 用酶标仪在 450 nm 波长下测定吸光度 （ OD 值 ） ， 通过标准曲
线 计算样品 中 大鼠肿瘤坏死因子 α （ TNF- α ） 浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml × 1 瓶 7 终止液 6ml × 1 瓶
2 酶标试剂 6ml × 1 瓶 8 标准 品（ 720ng/L ） 0.5ml × 1 瓶
3 酶 标包被 板 12 孔 × 8 条 9 标准品 稀释液 1.5ml × 1 瓶
4 样品 稀释液 6ml × 1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂 A 液 6ml × 1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂 B 液 6ml × 1/ 瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1 ．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但 应 避免反复冻融
2 ．不能检测含 NaN3 的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释 ： 本试剂盒提供原倍标准品一支 ， 用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
360ng/L 5 号标准品 150 μ l 的原倍标准品加入 150 μ l 标准品稀释液
180ng/L 4 号标准品 150 μ l 的 5 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液
90ng/L 3 号标准品 150 μ l 的 4 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液
45ng/L 2 号标准品 150 μ l 的 3 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液
22.5ng/L 1 号标准品 150 μ l 的 2 号标准品加入 150 μ l 标准品稀释液2. 加样 ： 分别设空白孔 （ 空白对照孔不加样品及酶标试剂 ， 其余各步操作相同 ） 、 标准孔 、
待测样品孔 。 在酶标包被板上标准品准确加 样 50 μ l ， 待测样品孔中先加样品稀释 液 40 μ l ，
然后再加待测样品 10 μ l （样品zui终稀释度为 5 倍 ） 。 加样将样品加于酶标板孔底部 ， 尽
量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 。
3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃ 温育 3 0 分钟 。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 μ l ，空白孔除外 。
7. 温育：操作同 3 。
8. 洗涤：操作同 5 。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μ l ，再加入显色剂 B50 μ l ，轻轻震荡混匀， 37 ℃ 避光显 色
15 分钟 .
10. 终止：每孔加终止 液 50 μ l ，终止反应 （此时蓝色立转黄色 ） 。
11. 测定 ： 以空白空调零 ， 4 50 nm 波长依序测量各孔的 吸光 度 （ OD 值 ） 。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品 的OD 值由标准曲线查出相应的浓度 ； 再乘以 稀释倍数 ； 或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式 ， 将样品的 OD 值代入方程式 ， 计算出样品浓度 ， 再乘以 稀释倍数 ，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2 ． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。
3 ．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4 ． 请每次测定的同时做标准曲线 ， 做复孔 。 如标本中待测物质含量过高 （ 样本 OD 值
大于标准品孔*孔的 OD 值 ） ，请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定 ， 计
算时请zui后 乘以 总稀释倍数（ × n × 5 ） 。
5 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6 ．底物请避光保存。
7 ．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .
8 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9 ．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1 ． 试剂盒保存 ： ； 2-8 ℃ 。
2 ．有效期： 6 个月