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鸡分泌型免疫球蛋白检测说明

阅读:597          发布时间:2014-11-24
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鸡分泌型免疫球蛋白AsIgA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围:                                                           96T

35ng/L – 1200ng/L

使用目的:

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中分泌型免疫球蛋白 AsIgA)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡分泌型免疫球蛋白 AsIgA水平。用纯化的 鸡分泌型免疫球蛋白 AsIgA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依 次加入分泌型免疫球蛋白 AsIgA,再与 HRP 标记的分泌型免疫球蛋白 AsIgA抗体结 合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP 酶 的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的分泌型免 疫球蛋白 AsIgA)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准 曲线计算样品中鸡分泌型免疫球蛋白 AsIgA)浓度。

试剂盒组成

1

30 倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(2400ng/L

0.5ml×1

3

酶标包被板

12 孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

1

5

显色剂 A

6ml×1

11

封板膜

2

6

显色剂 B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1.    标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

1200ng/L

5 号标准品

150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

600ng/L

4 号标准品

150μl 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

300ng/L

3 号标准品

150μl 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

150ng/L

2 号标准品

150μl 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

75ng/L

1 号标准品

150μl 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释

2.    加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl, 然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.    温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.    配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

5.    洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。

6.    加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

7.    温育:操作同 3。

8.    洗涤:操作同 5

9.    显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟。

10.  终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.  测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD  值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。

 

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