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鸡分泌型免疫球蛋白检测说明
阅读:597 发布时间:2014-11-24提 供 商 | 上海恒远生物科技有限公司 | 资料大小 | 268KB |
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资料类型 | PDF 文件 | 浏览次数 | 597次 |
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鸡分泌型免疫球蛋白A(sIgA)试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
35ng/L – 1200ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中分泌型免疫球蛋白 A(sIgA)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡分泌型免疫球蛋白 A(sIgA)水平。用纯化的 鸡分泌型免疫球蛋白 A(sIgA))抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依 次加入分泌型免疫球蛋白 A(sIgA),再与 HRP 标记的分泌型免疫球蛋白 A(sIgA)抗体结 合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶 的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的分泌型免 疫球蛋白 A(sIgA)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准 曲线计算样品中鸡分泌型免疫球蛋白 A(sIgA)浓度。
试剂盒组成
1 | 30 倍浓缩洗涤液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1 瓶 | 8 | 标准品(2400ng/L) | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12 孔×8 条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 样品稀释液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 说明书 | 1 份 |
5 | 显色剂 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 张 |
6 | 显色剂 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 个 |
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。
1200ng/L | 5 号标准品 | 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
600ng/L | 4 号标准品 | 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
300ng/L | 3 号标准品 | 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
150ng/L | 2 号标准品 | 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 |
75ng/L | 1 号标准品 | 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释 |
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl, 然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此 重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟。
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。