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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
中級(jí)會(huì)員·16年
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Favorgen位于中國臺(tái)灣國家生物技術(shù)園區(qū)。它通過自動(dòng)化系統(tǒng)建立了ISO合格工廠，
生產(chǎn)高質(zhì)量的分子生物學(xué)產(chǎn)品和臨床化學(xué)試劑。目前，F(xiàn)avorgen在美國，中國，韓國和丹麥設(shè)立分支機(jī)構(gòu)，并在30多個(gè)國家設(shè)立了分銷網(wǎng)絡(luò)。自成立以來，F(xiàn)avorgen已經(jīng)在其先進(jìn)的生產(chǎn)設(shè)施上投入了大量資金，以競爭力的價(jià)格為客戶提供高質(zhì)量的產(chǎn)品。Favorgen致力于通過與學(xué)術(shù)和行業(yè)合作伙伴的內(nèi)部和合作開展研究，以不斷提供高質(zhì)量的創(chuàng)新產(chǎn)品。
Nucleic-acids extraction Genomic DNA Extraction
核酸提取基因組DNA提取
Genomic DNA Extraction Blood DNA Mini / Midi / Maxi Kit
FavorPrepTM Blood Genomic DNA Extraction Mini Kit
Cat.No. : FABGK 000, 4 Preps
FABGK 001, 50 Preps
FABGK 001-1, 100 Preps
FABGK 001-2, 300 Preps
(For Research Use Only)
Kit Contents:
FABGK 000
sample)
FABGK 001
FABGK 001-1
FABGK 001-2
* Preparation of W1 Buffer, Wash Buffer and proteinase K solution for first use: | ||||
Cat. No: | FABGK000 (4 preps) | FABGK001 (50 preps) | FABGK001-1 (100 preps) | FABGK001-2 (300 preps) |
ethanol volume for W1Buffer * | 0.5 ml | 8 ml | 16 ml | 45 ml |
ethanol volume for Wash Buffer ** | 4 ml | 40 ml | 80 ml | 200 ml |
ddH2O volume for Proteinase K solution† | 0.1 ml | 1.1 ml | 1.1 ml | 1.1 ml |
規(guī)格:
原理：自旋柱(硅膠膜)
樣本：全血、血清、血漿、體液多可培養(yǎng)5×10 6細(xì)胞。
手術(shù)時(shí)間：<30分鐘
結(jié)合容量：高可達(dá)60克/柱DNA產(chǎn)量：4~8微克/200升全血
重要說明：
本系統(tǒng)中提供的緩沖區(qū)包含刺激物。在處理這些緩沖器時(shí)，戴上手套和實(shí)驗(yàn)室外套。
將蛋白酶K管保存在-20°C，然后再加入所需體積的無菌ddH2O到蛋白酶K管中，制成10毫克/毫升的原液。旋渦，確保蛋白酶K是復(fù)合的 泰利解散了。將庫存溶液存放在4°C。
次使用時(shí)，在W1緩沖液和洗滌緩沖液中加入所需體積乙醇(96%-100%)。
手術(shù)前將干洗或水浴預(yù)熱至60°C。
所有的離心步驟都是在微型離心機(jī)中全速進(jìn)行的(~18，000 x g)。
General Protocol:
“一般性議定書”：
提示：準(zhǔn)備一個(gè)干洗浴或水浴至60°C浴進(jìn)行第4步。預(yù)熱洗脫緩沖液至65°C為第13步(洗脫步驟)。
在開始以下步驟之前，請(qǐng)閱讀重要說明。
將多達(dá)200毫升的樣本(全血、血清、血漿、體液、布菲大衣)轉(zhuǎn)移到微離心管(未提供)。
如果樣品體積小于200毫升，加入適當(dāng)?shù)腜BS體積。
(可選)：如果需要無RNA的基因組DNA，在樣品中加入4升100 mg/ml的RNase A，在室溫下孵育2 min。
在樣品中加入20L蛋白酶K和200μl FABG緩沖液。通過脈沖旋渦充分混合.
不要直接將蛋白酶K添加到FABG緩沖液中。
在60℃下孵育15分鐘，以提取樣品。在孵化過程中，每隔3-5分鐘將樣品旋渦一次.
簡單地旋轉(zhuǎn)管子以去除從iid內(nèi)部滴下的液滴。
在樣品中加入200升乙醇(96%-100%)。用脈沖旋渦*攪拌10秒。
簡單地旋轉(zhuǎn)管子以去除從iid內(nèi)部滴下的液滴。
將FABG微型柱放置到收集管上。將混合物(包括任何沉淀物)小心地轉(zhuǎn)移到FABG微型柱上。離心機(jī)在6，000 x g下離心1分鐘，然后將FABG微型柱放置在nee上。 W收集管。
加入400升W1緩沖器到FABG迷你柱和離心機(jī)全速(18，000 x g)30秒，然后丟棄流過。
加入750升洗滌緩沖器到FABG迷你柱和離心機(jī)全速30秒，然后丟棄流過。
確保乙醇在次打開時(shí)加入到洗滌緩沖液中。
全速離心3分鐘，干燥柱。
重要的一步！這一步將避免殘留液體對(duì)后續(xù)酶反應(yīng)的抑制。
將FABG微型柱放置到發(fā)射管上。
在FABG微型柱膜中心加入50~200μl的洗脫緩沖液或DDH_2O(pH7.5-9.0)。將FABG微型柱站立3分鐘。
重要的一步！為了進(jìn)行有效的洗脫，要確保洗脫液被分配到膜中心并被*吸收。
全速離心1分鐘以逃避總DNA。
1. 將總DNA儲(chǔ)存在4°C或-20°C。特別議定書：
1.培養(yǎng)細(xì)胞
2. 收獲細(xì)胞
3. 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞
4. ?.將適當(dāng)數(shù)量的細(xì)胞(多5×10)轉(zhuǎn)移到1.5毫升的微離心管中。??。300×g離心5 min。
5. ?.仔細(xì)而*地移除上清液。
6. 單層細(xì)胞
7. ?.通過胰蛋白酶化或使用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞從盤子或燒瓶中分離出來。
8. ??.將適當(dāng)數(shù)量的細(xì)胞(多5×106)轉(zhuǎn)移到1.5毫升的微離心管中。
9. ?.300×g離心5 min。
10. ?v.仔細(xì)而*地移除上清液。
11. 再生細(xì)胞顆粒在PBS中的終體積為200毫升。
12. 從第二步開始遵循“一般議定書”。
布瓦大衣的制備
將全血在3，300 x g下在室溫下離心10分鐘，可得到三個(gè)不同的組分：上清層為血漿；中間層為布皮，內(nèi)含錐形。 額定紅細(xì)胞；下層含有濃縮的紅細(xì)胞。從步開始處理布菲大衣的一般協(xié)議。
從布菲皮毛中提取總DNA將比同等體積的全血產(chǎn)生5-10倍的DNA。
Troubleshooting
Possible reasons | Solutions |
Low or no yield of genomic DNA | |
Low amount of cells in the sample | Concentrate a larger volume of a new sample to 200 ul. If the sample is whole blood, prepare buffy coat |
Poor cell lysis | |
Poor cell lysis because of insufficient Proteinase K activity | Repeat the extraction procedure with a new sample. Use a fresh or well- stored Proteinase K stock solution. |
Poor cell lysis because of insufficient mixing with FABG buffer | Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the sample and FABG Buffer immediately and thoroughly by pulse-vortexing. |
Poor cell lysis because of insufficient incubation time | Repeat the extraction procedure with a new sample. Extend the incubation time and make sure that no residual particulates remain. |
Ethanol is not added into the lysate before transferring into FABG Mini Column | Repeat the extraction procedure with a new sample. |
Incorrect preparation of Wash Buffer | |
Ethanol is not added into Wash Buffer when first open | Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample. |
The volume or the percentage of ethanol is not correct before adding into Wash Buffer | Make sure that the correct volumes of ethanol (96- 100 %) is added into Wash Buffer when first open. Repeat the extraction procedure with a new sample. |
Elution of genomic DNA is not efficient | |
pH of water (ddH2O) for elution is acidic | Make sure the pH of ddH2O is between 7.5- 9.0. |
Use Elution Buffer (provided) for elution. | |
Elution Buffer or ddH2O is not completely absorbed by column membrane | After Elution Buffer or ddH2O is added, stand the FABG Mini Column for 5 min before centrifugation. |
Column is clogged | |
Blood sample contains clots | Repeat the extraction procedure with a new sample. Mix the blood sample well with anti-coagulant to prevent formation of blood clots. |
Sample is too viscous | Reduce the sample volume. |
Degradation of elutated DNA | |
Sample is old | Always use fresh or well-stored sample for genomic DNA extraction. |
Buffer for gel electrophoresis contaminated with DNase | Use fresh running buffer for gel electrophoresis. |
基因組DNA提取血液DNA Mini / Midi / Maxi試劑盒
FABGK 000 | FavorPrep™血液/培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA提取迷你試劑盒 | 4個(gè)準(zhǔn)備。 | 蛋白酶K粉末 | 在室溫（15~25℃）下保存2年。 |
FABGK 001 | 50個(gè)準(zhǔn)備。 | |||
FABGK 001-1 | 100個(gè)準(zhǔn)備。 | |||
FABGK 001-2 | 300個(gè)準(zhǔn)備。 | |||
FABGK 100 | FavorPrep™血液/培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA提取迷你試劑盒 | 100個(gè)準(zhǔn)備。 | RBC裂解緩沖液 FATL緩沖液 FABG緩沖液 W1緩沖液 洗滌緩沖液（濃） 洗脫緩沖液FABG迷你柱 2ml收集管 | 在室溫（15~25℃）下保存2年。 |
FABGK 300 | 300個(gè)準(zhǔn)備。 |
FABGK 002-S | FavorPrep血液/培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA提取Midi試劑盒 | 2個(gè)準(zhǔn)備。 | 蛋白酶K粉末 | 在室溫（15~25℃）下保存2年。 除蛋白酶K粉外，貯存于4℃。 |
FABGK 002 | 20個(gè)準(zhǔn)備。 | |||
FABGK000-MAXI | FavorPrep™血液/培養(yǎng)細(xì)胞基因組DNA提取Maxi試劑盒 | 2個(gè)準(zhǔn)備。 | Proteinase K Powder | 在室溫（15~25℃）下保存2年。 |
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上海起發(fā)是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購服務(wù)商
1：強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力，血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。
2：產(chǎn)品種類齊全，經(jīng)營超過700多品牌，基本涵蓋所有生物實(shí)驗(yàn)試劑耗材。
3：提供加急服務(wù)，貨品一般1-2周到貨。
4：富有競爭力的價(jià)格優(yōu)勢，絕大部分價(jià)格有優(yōu)勢。
5：多年積累良好的信譽(yù)，大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校，ROCHE，阿斯利康、國藥、fisher等知藥企。
6：上海起發(fā)還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech；sysy,TriLink BioTechnologies,Inc；worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。
7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā)，歡迎合作。
