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生孢梭菌制備
最近更新時(shí)間：2012-4-24
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生孢梭菌制備
是要計(jì)可培養(yǎng)的數(shù)量還是測(cè)菌液內(nèi)菌的數(shù)量。如果計(jì)可培養(yǎng)的數(shù)量的話就直接涂布到瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)就可以。若是要計(jì)菌液里的數(shù)量可以測(cè)一下OD值或者用熒光燃料染色后再在顯微鏡下計(jì)數(shù)。
菌懸液的濃度要求的確是每毫升小于100cfu，但是在50到100cfu之間，小于50的話容易出現(xiàn)假陰性。還有你是要做無(wú)菌的方法驗(yàn)證還是無(wú)菌培養(yǎng)基的靈敏度檢查呢？至于確定菌的量，是在硫乙醇中計(jì)數(shù)的。
其實(shí)無(wú)菌方法驗(yàn)證中的菌懸液的制備也是依中國(guó)藥典（2005年版二部）附錄XI H無(wú)菌檢查法中“培養(yǎng)基靈敏度檢查”項(xiàng)下的方法，制備成小于100 CFU/ml的對(duì)照用菌液。所以無(wú)論你做什么，菌懸液的制備方法都是一樣的。
具體方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培養(yǎng)24小時(shí)，然后吸取1毫升培養(yǎng)液用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，我的經(jīng)驗(yàn)是，稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了（這個(gè)你得自己多做幾次平行實(shí)驗(yàn)或驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，看到底稀釋到多少倍。zui初不好把握的時(shí)候可以同時(shí)培養(yǎng)幾個(gè)臨近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基到試管里（要求無(wú)菌），然后接種1ml制備好的菌懸液到硫乙醇試管里，在32.5度下培養(yǎng)18h，然后開(kāi)始計(jì)數(shù)。生孢梭菌在液體的硫乙醇里會(huì)長(zhǎng)成梭子一樣的單個(gè)菌落，這時(shí)拿的時(shí)候千萬(wàn)不要震動(dòng)，然后開(kāi)始計(jì)數(shù)（一個(gè)單獨(dú)的“梭子”計(jì)一個(gè)菌落）。
注：如果培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生渾濁，不便于計(jì)數(shù)。如果震動(dòng)試管也會(huì)渾濁。硫乙醇的量盡量大一點(diǎn)，這樣便于計(jì)數(shù)。
一些具體的東西，還需要你實(shí)際去操作后，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，再解決問(wèn)題。貌似你現(xiàn)在的經(jīng)驗(yàn)不是很足，的是找個(gè)懂的人帶你做幾次，或去別的公司或研究所參觀學(xué)習(xí)，這樣學(xué)起來(lái)會(huì)快一點(diǎn)。