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堿性磷酸酶研究應(yīng)用
最近更新時(shí)間：2011-9-16
提 供 商：上海研生實(shí)業(yè)有限公司資料大?。?/span>8B
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堿性磷酸酶也是目前免疫診斷試劑產(chǎn)品zui常用的標(biāo)記酶之一。與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）相比，ALP用作標(biāo)記酶的優(yōu)點(diǎn)是，穩(wěn)定性高、靈敏度高，缺點(diǎn)是成本高，標(biāo)記困難。
在研究中zui常用的ALP如下：
◇細(xì)菌堿性磷酸酶Bacterial alkaline phosphatase （BAP）, 來(lái)源：Escherichia coli C4 ；
◇ Shrimp alkaline phosphatase （SAP）, 來(lái)源：一種北極蝦 （Pandalus borealis） ;
◇ 小牛腸堿性磷酸酶Calf Intestinal Alkaline Phosphatase （CIP）;
◇ 胎盤堿性磷酸酶Placental alkaline phosphatase （PALP）和分泌性堿性磷酸酶the secreted alkaline phosphatase （SEAP），后者是前者的C末端短缺版——與PALP相比，SEAP沒(méi)有PALP的C末端zui后24個(gè)氨基酸（這24個(gè)氨基酸構(gòu)成了與糖基化磷脂酰肌醇靶向錨定的區(qū)域）
ALP主要應(yīng)用于分子生物學(xué)和酶免分析中：
★分子生物學(xué)中主要用作核酸的去磷酸化。因?yàn)镈NA通常會(huì)在5'端結(jié)合磷酸基團(tuán)，用ALP去磷酸化能防止DNA分子5'端與3'端連接，從而在后續(xù)步驟準(zhǔn)備好之前讓DNA分子抑制處于線性化狀態(tài);同樣，通過(guò)去磷酸化可用作放射標(biāo)記示蹤。通常用作這些目的用的zui多的是Shrimp alkaline phosphatase （SAP），因?yàn)樵诜磻?yīng)完成之后它是zui容易滅活的。
★酶免分析中應(yīng)用zui多的是ELISA，以競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)小分子抗原為例，抗體先與固相載體結(jié)合，然后讓待測(cè)樣品與事先經(jīng)ALP標(biāo)記過(guò)的該抗原競(jìng)爭(zhēng)地與抗體結(jié)合，洗去未反應(yīng)的過(guò)量ALP-抗原，加入顯色底物。則可以通過(guò)與按梯度濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)品繪出的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比從而知道待測(cè)樣品中抗原的濃度。ELISA中用的比較多的是 辣根過(guò)氧化物酶（HRP），底物為OPD， 深桔黃色 ，檢測(cè)波長(zhǎng)492nm；TMB， 藍(lán)綠色，檢測(cè)波長(zhǎng)450nm 堿性磷酸酶，底物為PNPP（對(duì)－消基苯磷酸酯）， 黃色 ，檢測(cè)波長(zhǎng)405nm
★目前工業(yè)上一個(gè)普遍的應(yīng)用是作為檢驗(yàn)牛奶的巴斯的滅菌的標(biāo)志：被巴斯德過(guò)高溫滅菌的分子會(huì)被滅活，向其中和未巴斯滅菌的牛奶中加入ALP的底物，2分鐘后未滅菌的樣品應(yīng)該顯黃色，如果待測(cè)樣品（指被巴斯滅菌過(guò)的牛奶）也能呈現(xiàn)相同顏色，則說(shuō)明巴斯滅菌溫度未過(guò)度。當(dāng)然總有例外，因?yàn)橛猩贁?shù)細(xì)菌會(huì)產(chǎn)生耐熱的ALP。