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常用的層析分析方法
最近更新時(shí)間：2011-3-31
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在分離分析特別是蛋白質(zhì)分離分析中，層析是相當(dāng)重要、且相當(dāng)常見(jiàn)的一種技術(shù)，其原理較為復(fù)雜，對(duì)人員的要求相對(duì)較高，這里只能做一個(gè)相對(duì)簡(jiǎn)單的介紹。
一、 吸附層析
1、 吸附柱層析
吸附柱層析是以固體吸附劑為固定相，以有機(jī)溶劑或緩沖液為流動(dòng)相構(gòu)成柱的一種層析方法。
2、 薄層層析
薄層層析是以涂布于玻板或滌綸片等載體上的基質(zhì)為固定相，以液體為流動(dòng)相的一種層析方法。這種層析方法是把吸附劑等物質(zhì)涂布于載體上形成薄層，然后按紙層析操作進(jìn)行展層。
3、 聚酰胺薄膜層析
聚酰胺對(duì)極性物質(zhì)的吸附作用是由于它能和被分離物之間形成氫鍵。這種氫鍵的強(qiáng)弱就決定了被分離物與聚酰胺薄膜之間吸附能力的大小。層析時(shí)，展層劑與被分離物在聚酰胺膜表面競(jìng)爭(zhēng)形成氫鍵。因此選擇適當(dāng)?shù)恼箤觿┦狗蛛x在聚酰胺膜表面發(fā)生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的連續(xù)過(guò)程，就能導(dǎo)致分離物質(zhì)達(dá)到分離目的。
二、 離子交換層析
離子交換層析是在以離子交換劑為固定相，液體為流動(dòng)相的系統(tǒng)中進(jìn)行的。離子交換劑是由基質(zhì)、電荷基團(tuán)和反離子構(gòu)成的。離子交換劑與水溶液中離子或離子化合物的反應(yīng)主要以離子交換方式進(jìn)行，或借助離子交換劑上電荷基團(tuán)對(duì)溶液中離子或離子化合物的吸附作用進(jìn)行。`
三、 凝膠過(guò)濾
凝膠過(guò)濾又叫分子篩層析，其原因是凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部。當(dāng)一混合溶液通過(guò)凝膠過(guò)濾層析柱時(shí)，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開(kāi)了。
四、 親和層析
親和層析的原理與*的抗原一抗體、激素一受體和酶一底物等特異性反應(yīng)的機(jī)理相類(lèi)似，每對(duì)反應(yīng)物之間都有一定的親和力。正如在酶與底物的反應(yīng)中，特異的廢物（S\'）才能和一定的酶（E）結(jié)合，產(chǎn)生復(fù)合物（E－S\'）一樣。在親和層析中是特異的配體才能和一定的生命大分子之間具有親和力，并產(chǎn)生復(fù)合物。而親和層析與酶一底物反應(yīng)不同的是，前者進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，配體（類(lèi)似底物）是固相存在；后者進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，底物呈液相存在。實(shí)質(zhì)上親和層析是把具有識(shí)別能力的配體L（對(duì)酶的配體可以是類(lèi)似底物、抑制劑或輔基等）以共價(jià)鍵的方式固化到含有活化基團(tuán)的基質(zhì)M（如活化瓊脂糖等）上，制成親和吸附劑M－L，或者叫做固相載體。而固化后的配體仍保持束縛特異物質(zhì)的能力。