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微生物菌種保藏方法及復(fù)壯
最近更新時(shí)間：2011-3-4
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微生物菌種保藏
在發(fā)酵工業(yè)中，具有良好性狀的菌種的獲得十分不容易，如何利用優(yōu)良的微生物菌種保藏技術(shù)，使菌種經(jīng)長(zhǎng)期保藏后不但存活健在，而且保證高產(chǎn)突變株不改變表型和基因型，特別是不改變初級(jí)代謝產(chǎn)物和次級(jí)代謝產(chǎn)物的高產(chǎn)能力，即很少發(fā)生突變，這對(duì)于菌種極為重要。
微生物菌種保藏技術(shù)很多，但原理基本一致，即采用低溫、干燥、缺氧、缺乏營(yíng)養(yǎng)、添加保護(hù)劑或酸度中和劑等方法，挑選優(yōu)良純種，是它們的休眠體，使微生物生長(zhǎng)在代謝不活潑，生長(zhǎng)受抑制的環(huán)境中。具體常用的方法有：蒸餾水懸浮；干燥-載體保藏等方法。
蒸餾水懸浮法
這是一種zui簡(jiǎn)單的菌種保藏方法，只要將菌種懸浮于無菌蒸餾水中，將容器封好口，于10℃保藏即可達(dá)到目的。好氣性細(xì)菌和酵母等可用此法保存。
干燥-載體保藏
此法適用于產(chǎn)孢子或芽孢的微生物的保藏。是將菌種接種于適當(dāng)?shù)妮d體上，如河砂、土壤、硅膠、濾紙及麩皮等，以保藏菌種。以沙土保藏用得較多，制備方法為：將河砂經(jīng)24目過篩后用10%~20%鹽酸浸泡3~4 h，以除去其中所含的有機(jī)物，用水漂洗至中性，烘干，然后裝入高度約1cm的河沙于小試管中，121℃間歇滅菌3次。用無菌吸管將孢子懸液滴入砂粒小管中，經(jīng)真空干燥8 h，于常溫或低溫下保藏均可，保存期為1~10年。土壤法以土壤代替砂粒，不需酸洗，經(jīng)風(fēng)干、粉碎，然后同法過篩、滅菌即可。一般細(xì)菌芽孢常用砂管保藏，霉菌的孢子多用麩皮管保藏。
退化菌種的復(fù)壯
退化菌種的復(fù)壯可通過純種分離和性能測(cè)定等方法來實(shí)現(xiàn)，其中一種是從退化菌種的群體中找出少數(shù)尚未退化的個(gè)體，以達(dá)到恢復(fù)菌種的原有典型性狀。另一種是在菌種的性能尚未退化前就經(jīng)常而有意識(shí)地進(jìn)行純種分離和性能的測(cè)定工作，以達(dá)到菌種的性能逐步有所提高。所以這實(shí)際上是一種利用自發(fā)突變不斷從中進(jìn)行選種的工作。具體的菌種的復(fù)壯措施如下：
純種分離 采用平板劃線分離法、稀釋平板法或涂布法均可。把仍保持原有典型優(yōu)良性狀的單細(xì)胞分離出來，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)恢復(fù)原菌株的典型優(yōu)良性狀，若能進(jìn)行性能測(cè)定則更好。還可用顯微鏡操縱器將生長(zhǎng)良好的單細(xì)胞或單孢子分離出來，經(jīng)培養(yǎng)恢復(fù)原菌株性狀。
通過寄主進(jìn)行復(fù)壯 寄生型微生物的退化菌株可接種到相應(yīng)寄主體內(nèi)以提高菌株的活力。
聯(lián)合復(fù)壯 對(duì)退化菌株還可用高劑量的紫外線輻射和低劑量的DTG聯(lián)合處理進(jìn)行復(fù)壯。