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胚胎成纖維細(xì)胞,沙眼衣原體PCR檢測(cè)試劑盒

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小鼠γ干擾素(IFN-γ)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

最近更新時(shí)間:2014-7-31

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小鼠γ干擾素(IFN-γ)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

檢測(cè)范圍: 96T
 75pg/ml-2400pg/ml

小鼠elisa試劑盒使用目的:
  本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中γ干擾素(IFN-γ)含量。

小鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
  本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的小鼠γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ),再與HRP標(biāo)記的γ干擾素(IFN-γ)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠γ干擾素(IFN-γ)濃度。 
試劑盒組成 
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(4800pg/ml) 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè)
標(biāo)本要求 
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

小鼠elisa試劑盒操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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