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超快核酸電泳液(干粉)
最近更新時間:2013-6-27
提 供 商:上海研生實業(yè)有限公司資料大?。?/span>17.6KB
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超快核酸電泳液(干粉)
產品及特點SuperBuffer-2是天澤基因在SuperBuffer基礎上開發(fā)的DNA/RNA兩用快速電泳液。它跟SuperBuffer一樣,能以高達30 V/cm的電壓電泳,達到快速電泳的目的。跟SuperBuffer不同的是,本產品對鹽離子濃度敏感度低,同時還能用于RNA電泳。其主要優(yōu)點是:
1.快速,電泳時間短, 對分辨率要求不高的電泳(如PCR和酶切檢測等)甚至可以在5-10分鐘內完成。
2.不影響后續(xù)的Southern雜交,DNA膠回收和DNA連接等反應。
3.價格與TBE(干粉)相當甚至更便宜。
4.DNA膠回收率高于使用TAE和TBE電泳的膠回收。
規(guī)格及成分成份20 L包裝50 L包裝
SuperBuffer-270克180克
使用手冊1份1份
運輸及保存常溫保存和運輸,有效期兩年。
自備試劑蒸餾水
使用方法一:溶液的配制
將本產品全部加到一個干凈的容量適當的容器中,按下表的用量加入蒸餾水并在室溫下用磁力攪拌器攪拌,直到干粉*溶解(一般需要30分鐘左右)。
20 L干粉50 L干粉
配法一(配制20X濃縮液)加水1升得到20X濃縮液加水2.5升得到20X工作液
配法二(直接配制工作液)加水20升得到1X工作液加水50升得到50X工作液
注:其他濃度的濃縮液配制可以按比例計算,但濃縮液濃度不能超過20X,否則干粉不能全部溶解。由于干粉含多種未*混合均勻的成份,所以必須一次性全部用于溶液的配制。如果緩沖液(濃縮液或工作液)長時間不用,滅菌后放4℃長期保存。
二: DNA電泳
將SuperBuffer-2濃縮液用蒸餾水稀釋到1X,除了需要使用較高電壓才能得到快速的電泳結果外,操作跟使用TAE和TBE基本一樣。需注意的地方是:
1.電壓:在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常規(guī)電壓,也可以使用較高電壓,只是使用常規(guī)電壓時,其快速的*性就體現不出來。使用較高電壓時,由于各電泳槽結構不同,*電壓需要稍做摸索。*次將工作電壓調到zui高電壓的80%左右,即平均25 V/cm(電極距離)。對一般minigel,一般可以用250-350V跑5-10分鐘;對大的電泳槽,可用400-450V跑5-10分鐘。每次根據電泳結果和緩沖液溫度決定各電泳槽的*工作電壓和時間。一般電壓越高,電泳時間越短。若在電泳時發(fā)生電流或電壓逐漸下降的現象,請檢查電泳儀是否設置了電流上限或功率上限。緩沖液電泳次數超過3次或緩沖液中有細菌/真菌生長也會出現此現象,需要更換新的緩沖液。
2.膠濃度:建議將瓊脂糖凝膠的濃度控制在0.8%左右,對于長度在100 bp以下的DNA 片段,可以將瓊脂糖凝膠的濃度提高到1.2%左右。由于每次溶膠過程中會丟失水份,所以在溶膠后適當補充水份(可以前后稱重),否則膠濃度會逐漸增加,DNA的移動速度會減低、產熱會增加。使用0.8%左右的瓊脂糖凝膠的好處是一方面可以節(jié)約膠的用量,另一方面可以使DNA的泳動速度更快,同時還能夠提高DNA的回收率。
3.染色:如果使用EB,把染料加入到融化后的凝膠中(只是EB的終濃度為0.4 -0.5 ug/mL,比使用TAE和TBE時稍高),但也可以加入到電泳緩沖液中或/和電泳上樣液中。如果使用天澤基因低毒染料綠如藍(DNAGREEN),將染料加入到融化后的凝膠中。如果只有膠中有染料,則長時間電泳后(超過20分鐘),大部分染料在高壓下會與DNA分離,DNA條帶可能會看不見或看起來很淡,此時應該再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(終濃度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2與SYBR Green I也有良好的兼容性,可以結合使用。
4.DNA條帶扭曲:DNA樣品中所含SDS量過高時(SDS主要來于上樣液), DNA條帶將出現扭曲,影響實驗效果。建議使用不含SDS的上樣液。
5.反復使用:1X SuperBuffer-2電泳液至少可以重復使用2-3次,如果使用大電泳槽,可以重復使用的次數會更多。
6.TAE和TBE膠:已經用TAE和TBE電泳液配置好的瓊脂糖凝膠可以直接放入1X SuperBuffer-2電泳液中按上述電泳條件電泳,但有時候會有扭曲現象。
三:RNA電泳
跟DNA電泳一樣,必須在使用前用水將SuperBuffer-2溶液稀釋到1X,其使用方法跟DNA電泳的主要區(qū)別是:
1.電壓:RNA電泳時,zui高使用電壓大約只有DNAzui高使用電壓的一半左右,所以一般minigel可以使用150 V左右的電壓。由于各實驗室電泳槽規(guī)格各異,*次電泳時,將工作電壓調到跟MOPS電泳一樣的電壓,每次再逐漸往上調電壓和時間,根據電泳結果和測定緩沖液的溫度決定今后的工作電壓。
2.RNA上樣液:RNA必須與含變性劑的RNA上樣液混合,并在80℃保溫10分鐘后冰浴2-5分鐘再上樣。不能直接將RNA樣品上樣或使用DNA上樣液,否則電泳不但很難得到清晰的條帶,并且在加樣孔中還會有看似DNA污染的條帶出現。推薦使用天澤基因的RNA變性/上樣/染色三合一即用型溶液RNAON。
3.膠濃度:RNA電泳使用1%-1.5%的瓊脂糖凝膠,用1X SuperBuffer-2配制。
4.染色:同DNA電泳。