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大提柱式全血RNAout
最近更新時(shí)間：2013-6-25
提 供 商：上海研生實(shí)業(yè)有限公司資料大小：20.7KB
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大提柱式全血RNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是在本公司柱式真菌RNAout（CAT#:80804）的大提升級產(chǎn)品，跟柱式真菌RNAout相比，它具有下列特點(diǎn)：
1. 樣品處理量大，zui多可以處理50mL液體培養(yǎng)物或2 g菌絲體。
2. 操作簡單快捷，整個(gè)過程只需要約30分鐘。
3. RNA純度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther雜交、microarray hybridization、cDNA合成等。
4. RNA產(chǎn)量高，一般在20-70 ug/mL酵母培養(yǎng)物（約2.0 ×107個(gè)細(xì)胞）。
5. 非酶細(xì)胞破裂法，適用于各種形態(tài)的真菌和各個(gè)種屬的真菌，包括Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharo-
myces pombe和Pichia pastoris等。
規(guī)格及成分 成 份 5次包裝
溶液A 50 mL
溶液B 50 mL
溶液C 100 mL
溶液D 30 mL
大提離心吸附柱 5套
通用洗柱液 100 mL
RNA洗脫液 10 mL
使用手冊 1份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 1. 將 50 mL液體真菌培養(yǎng)物在塑料離心管中5,000-7,000 rpm 4℃離心 1分鐘，并棄盡液體培養(yǎng)基（可以分多次離心）。如果是菌絲體，則直接稱取2克放入50 mL塑料離心管中。
2. 加入10 mL溶液A并充分吹打混勻。注意：溶液A存放時(shí)容易產(chǎn)生沉淀，如果有沉淀，用前請置于65℃融化并充分搖晃均勻。
3. 加入10 mL溶液B，劇烈振蕩30秒。
4. 65℃保溫5分鐘。
5. 5,000-7,000 rpm 4℃離心3-5分鐘，轉(zhuǎn)移上清到一自備的、干凈的50 mL塑料離心管中。
6. 在上清液中加入2 mL自備的氯仿，充分振蕩30秒混勻。
7. 4℃ 5,000-7,000 rpm離心3-5分鐘，轉(zhuǎn)移上清液到一自備的、干凈的50 mL塑料離心管中。
8. 加入相當(dāng)于上清液（體積越10 mL左右）3倍體積的溶液C和1倍體積的溶液D，充分混勻。
9. 將混合液分多次轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，每次轉(zhuǎn)移后需要室溫放置2-3分鐘以讓RNA跟吸附膜充分結(jié)合，然后5,000-7,000 rpm室溫離心30-60秒，棄收集管中的穿透液，然后再加入后一批混合液，重復(fù)操作，直到混合液全部掛柱。
10. *次洗滌：將10 mL通用洗柱液加到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
11. 第二次洗滌：一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)，但如果樣品OD260/280比值不高，可以再用10 mL通用洗柱液重復(fù)上步洗滌一次。
12. 室溫離心空柱子（帶收集管）半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)影響RNA的使用。
13. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free 50 mL塑料離心管中，加入1 mL RNA洗脫液。
14. 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA完整性的電泳檢測：
注意：普通DNA上樣液不含變性劑，更沒經(jīng)過去RNase處理，所以不要用于RNA電泳。
16. RNA產(chǎn)量和純度產(chǎn)率測定：
將5-10 uL RNA溶于TE緩沖液中（pH7.5-8.2之間）檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量（濃度×體積）和產(chǎn)率（RNA產(chǎn)量/細(xì)菌用量）。注意不要將RNA稀釋在DEPC水中檢測OD260和OD280，否則光吸收比在TE中測得的低10%-15%；也不要稀釋過度，使OD讀數(shù)在儀器的有效范圍之外，這樣得到的OD比值沒有意義。