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干細(xì)胞分離純化
點(diǎn)擊次數(shù)：1137 發(fā)布時間：2016-1-29
CD34是目前較為*的干細(xì)胞的表面標(biāo)志，故一般將CD34抗原作為干細(xì)胞分離純化的主要標(biāo)志。
1.骨髓及外周血CD34十細(xì)胞的陽性富集
利用各種方法分選出CD34十細(xì)胞，具體方法。
2.骨髓及外周血CD34十細(xì)胞的陰性富集
利用各種方法去除成熟的血細(xì)胞及免疫活性細(xì)胞，從而達(dá)到造血干/祖細(xì)胞的富集，即為陰性富集。由于骨髓、外周血中各種細(xì)胞成分的密度及比重不同，使用密度梯度分離可將其分成不同組分，在低密度層中含有富集的造血干/祖細(xì)胞。
3.臍血干細(xì)胞的純化
目前常用的臍血造血干/祖細(xì)胞的分離純化方法概括起來有以下幾種:①Fi-cOH、PerOll密度梯度離心法。臍血干/祖細(xì)胞主要集中于低密度組分中，但此方法操作開放，易污染。②三聯(lián)袋離心法。此法可去除59%紅細(xì)胞，體積減少56%，CD34十細(xì)胞回收率為87%。③甲基纖維素、明腔、淀粉等方法。Mahman等發(fā)現(xiàn)明膠對造血祖細(xì)胞回收率zui高，集落形成細(xì)胞(CFC)、CD34十細(xì)胞的回收率分別為92%和86%。④流式細(xì)胞技術(shù)分選法。該法分選的CD34十細(xì)胞及其亞群細(xì)胞的純度可高達(dá)95%99%，是目前分選CD34十細(xì)胞純度zui高的方法，但費(fèi)用昂貴，產(chǎn)率并不高，很難保持無菌。⑤免疫磁珠法。是用包被有單克隆抗體的磁性微粒特異性地與靶物質(zhì)結(jié)合，通過外加磁場的作用使結(jié)合有靶物質(zhì)的磁球被滯留，從而達(dá)到對靶細(xì)胞純化分離的作用。其CD34十細(xì)胞含量及回收率，分別為90%～99%及65%～75%。