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葡萄糖一6一磷酸酶
點(diǎn)擊次數(shù)：1332 發(fā)布時(shí)間：2016-1-6
(一)原理
葡萄糖一6一磷酸酶(glucose-6-phosphatase)是滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的標(biāo)志酶。葡萄糖6一磷酸酶是糖異生途徑的關(guān)鍵酶，其轉(zhuǎn)錄的多少，決定著糖異生的速度。ELISA試劑盒
(二)材料
1．標(biāo)本組織切片。
2．Tris一馬來酸緩沖液(pH6．5)
(1)A液：取Tris1．2g、馬來酸1．16g，溶于100ml蒸餾水中。
(2)B液：0．2mol／LNaOH溶液(將0．8gNaOH溶于lOOml蒸餾水即成)。取A液25ml，B液約20ml，調(diào)pH至6．5后，加蒸餾水至100ml。
3．工作液須于用前現(xiàn)配，如有沉淀，應(yīng)過濾。其配制方法為：0．125%D一葡萄糖一6一磷酸鈉鹽或鉀鹽20ml，0．2mol／L Tris一馬來酸緩沖液(pH 6．5)20ml，3％醋酸鉛3ml，蒸餾水7ml。
4．0．1mol／L磷酸緩沖液(含3％多聚甲醛)。ELISA試劑盒
(三)方法
1．用含3％多聚甲醛的o．1mol／L磷酸緩沖液于4℃固定組織切片標(biāo)本2min。
2．用蒸餾水洗5次，各2min。
3．置于工作液中，37℃孵育15~20min。
4．用蒸餾水洗2次，各2min。
5．其余步驟同酸性磷酸酶染色步驟7～10。
6．對(duì)照設(shè)立對(duì)照的方法有兩種：①在作用液中不加反應(yīng)底物。②用口甘油磷酸鈉代替底物。
(四)結(jié)果
酶活性部位有棕黑色沉淀，對(duì)照標(biāo)本無此沉淀。ELISA試劑盒