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技術(shù)文章

淋巴細(xì)胞亞群的計(jì)數(shù)

點(diǎn)擊次數(shù):1326 發(fā)布時(shí)間:2015-7-13


外周血中存在幾種成熟的淋巴細(xì)胞亞群。78組成這些亞群的有:具多種不同功能的胸腺淋巴(T)細(xì)胞;合成和分泌特異性抗體,來源于淋巴結(jié)的(B)淋巴細(xì)胞;null細(xì)胞(也叫第三群細(xì)胞),它參與抗體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用及自然細(xì)胞毒作用(自然殺傷細(xì)胞)。這些亞群是根據(jù)結(jié)合在細(xì)胞膜上的一個(gè)或多個(gè)糖蛋白而定義的。根據(jù)簇設(shè)計(jì)和表達(dá)各種抗原的細(xì)胞類型,可以在附錄的CD分子表中,找到這些糖蛋白的列表。這些糖蛋白許多都被認(rèn)為對分子功能很重要。但在T淋巴細(xì)胞中,一個(gè)單獨(dú)的細(xì)胞表面糖蛋白的出現(xiàn)并不能說明細(xì)胞的功能特征。79.80例如,有些帶CD8標(biāo)志的T淋巴細(xì)胞是細(xì)胞毒細(xì)胞,其它的卻是抑制/效應(yīng)細(xì)胞。帶CD4標(biāo)志的T淋巴細(xì)胞更異質(zhì):有些作為誘導(dǎo)細(xì)胞促進(jìn)效應(yīng)細(xì)胞克隆的擴(kuò)大;有些作為輔助細(xì)胞,促進(jìn)抗體分泌性B淋巴細(xì)胞的生長;還有其它的作為抑制/效應(yīng)細(xì)胞或遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的效應(yīng)因子。

細(xì)胞膜表面糖蛋白很有用,因?yàn)樗棺R(shí)別和計(jì)數(shù)具有不同功能的淋巴細(xì)胞亞群成為可能。但目前有關(guān)T淋巴細(xì)胞表面糖蛋白的描述,通常都定義了實(shí)行不止一種功能的亞群。帶有某一特定糖蛋白標(biāo)志物的細(xì)胞數(shù)增加或減少,并不意味那些細(xì)胞在體內(nèi)只實(shí)行某一特定功能。由于這個(gè)原因,淋巴細(xì)胞亞群的計(jì)數(shù)結(jié)果與疾病診斷或?qū)χ委煹姆磻?yīng)有經(jīng)驗(yàn)上的。而且,這些經(jīng)驗(yàn)上的關(guān)聯(lián),在臨床上很有用。

計(jì)數(shù)血液中淋巴細(xì)胞亞群的方法是以多克隆抗體的提供為基礎(chǔ)的,這些多克隆抗體能識(shí)別單獨(dú)的細(xì)胞表面糖蛋白。典型的操作是:將熒光標(biāo)記的多克隆抗體與外周血一起孵育,然后在流式細(xì)胞儀中計(jì)數(shù)反應(yīng)細(xì)胞。流式細(xì)胞儀是由一個(gè)或多個(gè)激光源、成像檢測器和細(xì)胞束(該細(xì)胞束能直接通過激光光路)產(chǎn)生裝置構(gòu)成的細(xì)胞分析儀。用直角光散射,調(diào)節(jié)流式細(xì)胞儀,可根據(jù)淋巴細(xì)胞的大小識(shí)別淋巴細(xì)胞,合適抗體處理細(xì)胞后,用直接熒光計(jì)數(shù)帶有特異細(xì)胞表面糖蛋白的淋巴細(xì)胞。通常用結(jié)合不同熒光的兩種不同抗體同時(shí)計(jì)數(shù)帶有特異性表面糖蛋白的淋巴細(xì)胞,該技術(shù)叫熒光分析法,它用處很大。當(dāng)定義了更多的表面標(biāo)志物的時(shí)候,就有可能鑒別和定量在體內(nèi)僅實(shí)行某一單獨(dú)功能的淋巴細(xì)胞亞群。83而且,體內(nèi)刺激細(xì)胞后,通過檢測細(xì)胞因子的合成,也能確定特異性的細(xì)胞亞群在功能上是否完整。使用能通透細(xì)胞的試劑,然后用相應(yīng)的單克隆抗體染色,可檢測好幾種細(xì)胞因子(如腫瘤壞死因子,IL-2,γ干擾素)。

淋巴細(xì)胞亞群的計(jì)數(shù),也叫T或B細(xì)胞表面標(biāo)志物的分析,由此得到不同類型的結(jié)果。每一種淋巴細(xì)胞亞群的百分?jǐn)?shù)和數(shù),都應(yīng)該與健康個(gè)體的結(jié)果做對比。另外,在典型的分析中,應(yīng)報(bào)告一型與另一型(如輔佐/誘導(dǎo),抑制/細(xì)胞毒細(xì)胞比率)的比率。

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