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酶免疫測(cè)定結(jié)果的影響因素
點(diǎn)擊次數(shù)：1366 發(fā)布時(shí)間：2015-3-2
酶免疫測(cè)定結(jié)果的影響因素
外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過長和標(biāo)本凝固不全等。
1．標(biāo)本溶血 要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
2．標(biāo)本被細(xì)菌污染 樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的p—半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
3．標(biāo)本貯存時(shí)間過長 標(biāo)本在2～8~C下保存時(shí)間過長，IgG可聚合成多聚體，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性。血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8~C下保存1周，如為有菌操作，則建議冷凍保存。樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在一70~C以下。
4．標(biāo)本凝固不全 血液采集后，如收集管中無促凝劑和抗凝劑，則血液通常在半小時(shí)后開始凝固，18～24h*凝固。日常檢驗(yàn)中，常在血液還未開始凝固時(shí)即離心分離血清，此時(shí)因血液沒有*凝固，離出的“血清"并非為*的血清，其中仍殘留部分纖維蛋白原，如將其加入微孔中，在ELISA測(cè)定過程中仍可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果。因此，血液標(biāo)本采集后，應(yīng)使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br>
5．冷凍保存標(biāo)本避免反復(fù)凍融 冷凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。此外，標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的渾濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。