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研生試劑-果蠅類免疫染色的特殊性
點擊次數(shù)：1147 發(fā)布時間：2014-5-21
elisa試劑盒免疫組化染色的標(biāo)準(zhǔn)程序可以用于對果蠅類抗原的定位。一般而言，果蠅類標(biāo)本染色的成功與否依賴于本章開始和第五章所討論的原則。果蠅類標(biāo)本免疫染色的復(fù)雜性在于其不同發(fā)育階段出現(xiàn)不同的保護(hù)衣殼，包括以下結(jié)構(gòu)：絨毛膜、卵黃膜和角質(zhì)層。它們均是特定階段的自身環(huán)境保護(hù)屏障，在發(fā)育和生存中起著重要的作用，就方法而言，去除這些結(jié)構(gòu)有利于抗體的透入，且不應(yīng)改變所研究的抗原特性。因此，在設(shè)計果蠅類標(biāo)本免疫染色的方案中應(yīng)該考慮使背景降至zui低的程度，對抗體的選擇尤其關(guān)鍵。
elisa試劑盒果蠅類標(biāo)本免疫染色的方法可以分為兩個步驟。*步為處理標(biāo)本，包括固定和透化處理組織或整個器官。要求處理條件強烈，以便去除果蠅類的保護(hù)衣殼、固定抗原以及有利于抗體透入。固定和透化方法的選擇可依據(jù)果蠅類發(fā)育的不同階段而定。在形成角質(zhì)層前的胚胎早期，可用有機(jī)溶劑、甲醛和醇類的混合物固定和透化組織，以便抗體易于透入。正常情況下超聲處理可以打開角質(zhì)層。本章介紹的固定方法包括整個胚胎發(fā)育的早期和晚期。來自發(fā)育晚期的組織通常先被破碎成碎片，然后按標(biāo)準(zhǔn)的多聚甲醛／去污劑法固定和染色。
果蠅類標(biāo)本染色的第二步是加入一抗及檢測。一抗的加入及檢測與后續(xù)的二抗染色有關(guān)，但僅有一點不同的是在zui后染色中取決于所需分辨水平。大多數(shù)抗原定位實驗使用酶標(biāo)記的二級試劑。這種方法靈敏度高，并且不需要共聚焦顯微鏡。如要求更高的分辨率或需在同一樣本中觀察兩種抗原時，則采用熒光染料標(biāo)記的二抗試劑。由于果蠅類標(biāo)本較厚，要求使用共聚焦顯微鏡觀察染色結(jié)果，且依賴于良好的共聚焦設(shè)備。以下分別討論這兩部分技術(shù)。