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柱式全血RNAout
點(diǎn)擊次數(shù)：1563 發(fā)布時間：2013-6-25
柱式全血RNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品經(jīng)過天澤基因精心優(yōu)化而得，多項(xiàng)指標(biāo)超過國內(nèi)外同類產(chǎn)品。本產(chǎn)品是天澤基因在血液RNAOUT（CAT#：3071）基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式升級產(chǎn)品，專門從動物全血樣品中快速提取總RNA。跟血液RNAOUT相比，本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 比血液RNAOUT更加簡單快捷，直接使用新鮮的或冷凍的抗凝全血樣品，不需裂解紅細(xì)胞等任何預(yù)處理步驟，整個提取過程只需要十分鐘左右，可以全在室溫下進(jìn)行。
2. 產(chǎn)量和純度更高，OD260/280均在2.0左右，產(chǎn)率一般為2-5 ug/mL人血。
3. 每次微量提取的zui大樣品處理量可以達(dá)到1.5 mL，高于進(jìn)口的同類產(chǎn)品。
4. 與常用的抗凝劑（包括肝素，EDTA，檸檬酸鈉，草酸鈉）兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern雜交等研究。
規(guī)格及成分 成 份 50次包裝
溶液A 50 mL
溶液B 15 mL
溶液C 50 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脫液 10 mL
使用手冊 1份
運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 1. 將0.2-1.5 mL新鮮或解凍后的抗凝全血加入到1.5 mL塑料離心管中。
2. 12000-15000 g室溫離心3分鐘，棄上清（血漿）。如果此時血液細(xì)胞沉淀體積大于0.2 mL， 則需要減少血液的使用量，具體減少量需根據(jù)具體情況決定，因?yàn)楦鱾€個體（尤其是患者）血液中白細(xì)胞數(shù)目差別很大。
3. 將1 mL溶液A加入到血液細(xì)胞沉淀中，用移液槍吹打沉淀使細(xì)胞裂解。
4. 將0.3 mL的溶液B加入到離心管中，劇烈震蕩30秒。
5. 和0.2 mL氯仿加入到離心管中，劇烈震蕩30秒。
6. 12000-15000 g室溫離心3-5分鐘，將上清液（為無色或淺紅色，約0.5-0.9 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈離心管中。注意：轉(zhuǎn)移的液體不要超過0.7 mL，否則下一步不能加入等體積的溶液C。為防止污染，留100 uL左右的上清液。下層有機(jī)相一般呈深紅色，中間層為白色，含有DNA，蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞破碎物，避免觸及或吸取。
7. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。
8. 分兩次將溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，每次轉(zhuǎn)移后12000-15000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。
10. 如果有必要，可以再加0.3 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。注意：增加此步可以進(jìn)一步提高RNA的純度。
11. 室溫12000-15000 g離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會影響RNA的后續(xù)反應(yīng)。
12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一個RNase-free的收集管中，加入50-100 uL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
13. 12000-15000 g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10 μL RNA溶于TE緩沖液中（pH7.5-8.2之間）檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量（濃度X體積）和產(chǎn)率（RNA產(chǎn)量/組織用量）。人血RNA產(chǎn)率一般為2-5 ug/mL。
16. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在2.0左右（具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)），高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。