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免疫球蛋白提取：連續(xù)提取免疫球蛋白
點擊次數(shù)：1528 發(fā)布時間：2012-2-16
(一)試劑及配制
1．飽和硫 酸銨液
2．各種磷酸鹽緩沖液
⑴ 0.2mol/L原液
A液：0.20Mol/L NaH2PO4液
NaH2PO4·H2O 31.20g
H2O 1 000ml
B液：0.20Mol/L Na2HPO4液
Na2HPO4·12H2O 71.7g
H2O 1 000ml
⑵ 0.10Mol/L pH8.0PB液
A液： 53ml
B液： 947ml
H2O 加至 2 000ml
⑶ 0.005Mol/L pH8.0 PB液
取0.10Mol/L pH8.0 PB液100ml，加H2O至2 000ml
⑷0.025 Mol/L pH8.0 PB液
取0.10Mol/L pH8.0 PB液500ml，加水至2 000ml。
⑸ 0.035 Mol/L pH8.0 PB液
取0.10.1 Mol/L pH8.0 PB液700ml，加水至2 000ml。
⑹ 0.10Mol/L pH5.8PB液
A： 920ml
B： 80ml
H2O 加至 2 000ml
⑺ 0.40Mol/L pH5.2pB液
a液.0.40Mol/L NaH2PO4液
NaH2PO4·2H2O 62.40g
H2O 加至 1 000ml
B液.0.40Mol/L Na2HPO4液
Na2HPO4·12H2O 143.4g
H2O 加至 1 000ml
取a液 960ml
b液 40ml
混合即可。
⑻ 0.01 Mol/L pH8.0PBS液
取0.10Mol/L pH8.0 PB液 100ml
NaCl 8.20g
H2O 加至 1 000ml
3．DEAE-纖維素(細粒級)
4．SephadexG200
(二)操作方法
1．取一定量的血清，加等量的生理鹽水，然后逐漸滴加飽和硫 酸銨溶液，使成40％的飽和度,靜置30min。
2．10 000r/min離心10min，去上清。
3．加入一定量的生理鹽水，使沉淀溶解，再加入飽和硫 酸銨溶液，使成40％飽和度。10 000r/min離心10min，去上清。
4．再重復步驟3一次。
5．將沉淀以少量生理鹽水溶解，透析，除鹽濃縮。
6．制備DEAE-纖維素柱，以0.005Mol/L pH8.0PB液平衡。
同時制備SephadexG200凝膠柱，以0.01Mol/L pH8.0PBS液平衡并進行洗脫。
7．以0.005Mol/L pH8.0PB液洗脫，得蛋白液為IgG。
7． 以0.025 Mol/L pH8.0PB液洗脫，得蛋白主要是IgE，再過SephadexG200凝膠柱，收集*峰即為純IgE。
8． 以0.035 Mol/L pH8.0PB液洗脫，得蛋白主要是IgA，再過SephadexG200凝膠柱，收集*峰即為純IgA。
10．以0.10Mol/L pH5.8PB液洗脫，洗脫液主要有IgM、IgG及白蛋白的混雜物。
11．以0.40Mol/L pH5.2PB液洗脫，得蛋白液主要是IgM。過SephadexG200，收集第二峰即為純IgM。