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溶解多肽的方法及多肽應(yīng)用的注意點(diǎn)
點(diǎn)擊次數(shù)：2602 發(fā)布時(shí)間：2012-1-5
多肽的溶解度取決元計(jì)算的物理特性。氨基酸可分類為酸性，堿性，極性，非極性，疏水性。多肽有高含量的非極性疏水性氨基酸或極性不帶電荷的氨基酸。建議溶解在有機(jī)溶液中（例如：DMF，甲醇，丙醇，異丙醇，DMSO）?？傊?，酸性多肽一般溶解于堿性溶液中，而堿性多肽溶解在酸性溶液中。
氨基酸的屬性
堿性：Arg,His（H）,Lys（K）
非極性疏水性：Ala（A）,Ile（I），Len（L）,Met（M）,Phe（F）,Pro（P）,Trp（W）,Val（V）
極性不帶電荷：Asn（N）,Cys（C）,Glg（G）,Gln（Q）,Ser（S）,Thr（T）,Tyr（Y）
酸性：Asp（D）,Glu（E）
Bachem公司發(fā)布每批號(hào)的產(chǎn)品分析報(bào)告（ADS），提供在特殊溶液中的溶解度?？蛻艨梢宰们榘串a(chǎn)品分析報(bào)告中溶液來(lái)溶解多肽?；蛘呖蛻艨梢园聪铝蟹椒ㄔ囼?yàn)小量樣品中多肽的溶解度。由于多肽的溶解特性取決于其氨基酸成分。在選擇適當(dāng)?shù)娜軇┲拔覀兘ㄗh先查一下多肽的氨基酸序列，
1、 堿性多肽（堿性氨基酸數(shù)量＞酸性氨基酸數(shù)量）應(yīng)該先用小量酸性氨基酸溶液（例如：醋酸或三氟醋酸）溶解，然后稀釋劑所需的濃度。制備高濃度的儲(chǔ)存液時(shí)，應(yīng)用80%醋酸溶解多肽。也可用20%醋酸溶解減少醋酸對(duì)于檢測(cè)系統(tǒng)的不良影響。
2、 酸性多肽（酸性氨基酸數(shù)量＞堿性氨基酸數(shù)量）應(yīng)該先用小量堿性氨基酸溶液（例如0.1%氨水，NH4OH）,然后用水稀釋到所需的濃度。應(yīng)該注意，對(duì)于含有半胱氨酸（Cysteine）的多肽要避免使用氨水，因?yàn)樵赑H堿性條件下會(huì)促使二硫鍵的形成。
3、 中性或者高度疏水性多肽，含有許多極性不帶電荷的氨基酸或非極性疏水性氨基酸，應(yīng)該用小量的有機(jī)溶劑（例如：DMF，甲醇，丙醇，異丙醇，DMSO）溶解，因?yàn)镈MSO可形成氨基酸甲風(fēng)化。
4、 離液劑（例如尿素，鹽酸胍）有時(shí)用來(lái)溶解凝聚的多肽，但如有可能應(yīng)當(dāng)盡量不用，因?yàn)殡x液劑會(huì)干擾多肽的生物學(xué)應(yīng)用。在個(gè)別情況下，多肽的溶解時(shí)間較長(zhǎng)，甚至達(dá)幾個(gè)小時(shí)，在水浴中超聲波打幾分鐘可促使大顆粒多肽的溶解。但是不要加度加熱。含有Trp,Met,Cys的多肽要額外小心避免氧化，應(yīng)該用無(wú)氧的水或還原劑（例如DTT）來(lái)溶解。儲(chǔ)藏時(shí)，多肽溶液應(yīng)該分裝后置于-15℃，可以保持穩(wěn)定幾個(gè)月，含有Trp,Met,Cys的多肽半衰期較短，不宜長(zhǎng)期保存。
多肽在溶解和儲(chǔ)存時(shí)，應(yīng)遵循下列要點(diǎn)：
1、 多肽的凈重
在準(zhǔn)備多肽的溶液時(shí)，應(yīng)考慮到多肽的凈重問(wèn)題。研究用多肽的HPLC純度一般達(dá)到95%以上，而多肽的固體含量在70-90%范圍內(nèi)，這是因?yàn)槎嚯暮械钠渌x子（例如：醋酸/三氟 乙酸）和殘余的潮氣。每個(gè)批號(hào)的多肽含量都記錄在分析數(shù)據(jù)報(bào)告上
2、 多肽凍干粉的處置
*多肽長(zhǎng)期保存應(yīng)放置在-15℃以下。
*多肽容易吸潮，應(yīng)先把裝有多肽的瓶放在玻璃器中，至于室溫下平衡溫度，然后才能打開(kāi)瓶稱量多肽，多肽吸收水分后將影響穩(wěn)定性使多肽含量減少。
*從瓶中稱出所需量的多肽后，應(yīng)立刻將瓶蓋擰緊。
3、溶解于儲(chǔ)存
*多肽應(yīng)溶解在適當(dāng)?shù)娜芤褐校核嵝远嚯膽?yīng)溶解在堿性溶液中，堿性多肽應(yīng)溶解在酸性溶液中。必要時(shí)可用超聲波幫助溶解。
*多肽含有Trp,Net,Cys應(yīng)該特別注意免氧化.應(yīng)該用無(wú)氧的水或還原劑.
*儲(chǔ)存時(shí),多肽溶液應(yīng)該分裝后置于-15℃以下,多數(shù)含有Trp,Net,Cys的多肽半帥期教短,不應(yīng)長(zhǎng)期保存。