QQ交谈
您所在位置：请输入产品关键字：
邮编：200000
联系人：王小姐
电话：021-59989018
传真：
手机：15201736385
售后电话：15201736385
留言：发送留言
个性化：www.shyskits.com
网址：www.shyskits.com
商铺：http://www.mtfinger.com/st175729/
植物RNA的提取
点击次数：2789 发布时间：2011-4-27
www.mtfinger.com/st175729/product_4737054.html有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA， 而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA相互作用。酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失，或形成不溶性复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA的化学降解和酶解。对于这些植物材料，用常规的RNA提取方法（如胍法、苯酚法和十六烷基*基溴化胺法等）难以提取出其RNA！
纵观上RNA提取的试剂盒，如常见的TRIzol，以及一些的RNA提取试剂盒均很难从多糖多酚的植物中提取高质量的RNA，酚类物质的含量会随着植物的生长而增加。因而从幼嫩的植物材料中更容易提取RNA。此外，针叶类植物的针叶中多酚的含量比在落叶植物的叶子中要高得多。在植物材料匀浆时，酚类物质会释放出来，氧化后使匀浆液变为褐色，并随氧化程度的增加而加深，这一现象被称为褐化效应。被氧化的酚类化合物（如醌类）能与RNA稳定地结合，从而影响RNA的分离纯化；多糖的污染是提取植物RNA时常遇到的另一个棘手的问题。植物组织中往往富含多糖，而多糖的许多理化性质与RNA很相似，因此很难将它们分开。在去除多糖的同时RNA也被裹携走了，造成RNA产量的减少；而在沉淀RNA时，也产生多糖的凝胶状沉淀，这种含有多糖的RNA沉淀难溶于水，或溶解后产生粘稠状的溶液。由于多糖可以抑制许多酶的活性，因此污染了多糖的RNA样品无法用于进一步的分子生物学研究。
Trizol主要成份是异硫氰酸胍和苯酚，没有特殊去除多糖和多酚的试剂，所以对于大多数多糖多酚的植物无法成功提取，即使添加了如2-巯基乙醇、二硫苏糖醇（DTT）或半胱氨酸之类的防止酚氧化的试剂也很难提取。RNeasy Plant Mini Kit主要裂解液是盐酸胍或则异硫氰酸胍。