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人elisa試劑盒批發(fā)免疫測定技術(shù)的操作方法
點擊次數(shù)：1402 發(fā)布時間：2018-9-18
人elisa試劑盒批發(fā)免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的確診試劑離不開的質(zhì)料,如抗原抗體,酶等。曾經(jīng)用于免疫測定的抗原一般為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和運用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的符號物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。近年來,跟著分子生物學(xué)的展開,運用基因工程方法制備各種特別的。
操作方法：
雙抗體夾心法：
1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃
隔夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗刷，下同）。
2、加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗刷。（一同做空白孔，陰性對照孔及
陽性對照孔）。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗刷。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中參與暫時制作的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、中止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。
6、效果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼查詢效果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號標(biāo)明。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)則的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。