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抗卵巢抗體透明帶（Zona pellucida，ZP） 抗體檢測
點擊次數(shù)：2996 發(fā)布時間：2011-3-10
抗卵巢抗體透明帶（Zona pellucida，ZP） 抗體檢測
透明帶（Zona pellucida，ZP）是圍繞在卵細(xì)胞周圍的一圈嗜酸性、明膠樣結(jié)構(gòu)。ZP有很強(qiáng)的免疫原性，能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生全身與局部的細(xì)胞與體液免疫，產(chǎn)生抗透明帶抗體（anti-zonapellucidaantibody，AZP）。AZP與女性不孕癥有關(guān)。檢測AZP的方法有免疫沉淀反應(yīng)，間接免疫熒光法，間接血凝，膠乳凝集試驗，RIA及ELISA法等。無論何種檢測方法，均需透明帶抗原。由于豬和人卵透明帶有共同抗原，故可用豬卵透明帶抗原作試驗。以下介紹間接ELISA法檢測AZP。
1．試劑 ZP精制抗原：用注射器從新鮮豬卵巢中吸取卵泡液，在解剖鏡下從卵泡液中收集卵子，用PBS洗數(shù)次，放在含0．1％枸櫞酸鈉的0．05mol／LPBS（pH7．0）中，強(qiáng)力振蕩lmin，然后用PBS洗幾次。再將卵子加熱溶解后可獲得熱溶解抗原，即豬ZP的粗制抗原。經(jīng)SephadexG-100凝膠過濾組分后便可獲精制抗原?？蛇x用高70cra，直徑1．2cra的層析柱。凝膠柱用0．01mol／L，pH7．4PBS流洗平衡后，加樣，再用PBS洗脫，分管收集。將*蛋白峰用30％聚乙二醇或變色硅膠濃縮，經(jīng)PBS透析24h后即為ZP精制抗原。
2．操作步驟 每孔用0．1mLZP精制抗原（濃度用方陣法滴定）包被，置4~C過夜，用洗滌液洗3次，每次3min：每孔加含10％小牛血清的PBS 0．1mL，37~C封閉30rain，用洗滌液洗3次。加待測血清0．1mL，37℃!h后洗3次。加zui適濃度HRP-羊抗人IgC 0．1mL，37~C反應(yīng)1h，洗滌。加新鮮配制的底物溶液，每孔0．1mL，室溫作用20min后，各孔加2mol／LH2S040．1mL終止反應(yīng)。
3．注意事項 如果用豬ZP做為抗原檢測人血清AZP，待測血清須用豬紅細(xì)胞吸收。如用人卵ZP作為抗原，待測血清須用AB型人紅細(xì)胞吸收。
4．結(jié)果判定與臨床意義 與陽性、陰性對照血清參比，目測顯黃棕色者為AZP陽性， 無色或極淡黃色為陰性。也可測492nm的吸光度（A）值。若待測標(biāo)本A值大于或等于陰性對照血清A值的X+2．5S為陽性。