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elisa試劑盒白介素類純化單克隆抗體方法
點擊次數(shù)：1031 發(fā)布時間：2017-3-2
elisa試劑盒白介素類從小鼠腹水中純化抗體常是單克陛抗休緩沖液溶解 ，用50信體積的上述緩沖特 征鑒定，應(yīng)用 中的一 個重 要 步驟 。 目 析 ，然后 離心 取 上清 液。 即為正 辛 酸純化
前zui 常用的方 法為離子 交換 層析 法， 但該法 物 。
既不 適于多 種細(xì)胞及 腹水 同時純 化鑒定 ，也 =， DEAE-22柱 層 析：DEAE一22甩
不 適 于大規(guī)模 ，且 洗脫 液 中抗體 含量較 常 規(guī)方 法處 理 ，以含 0．02M NaG】的 0．02M
低 ，常需 濃縮后才 能 使 用。近 來 ，ReLk M pH7．4Tris-HC1平 衡。
(1987)等 報導(dǎo) 了正辛酸 純化法 。本 實驗 室 在 3D o虞 水 2ml對 含 0．02世 NaG】的
從 腹水 純 化抗 HaG單克 隆抗 體 中，用正 辛 0．02 pⅡ7．4Tr~s-HC1攪 拌透 析 4小 時，
酸 法與 DEAE 柱 層析進 行對照 、分析 ，結(jié)果 上拄 ，以分 別 含 0．02M ，0．04 ，0．06皿 ，
elisa試劑盒白介素類顯示了正 辛酸法有快 速 、簡便 ，抗 體濃 度高 ， 0．08 ，0．10M ，0．12M ，0．15M NaC1的
適 臺大量 的優(yōu) 點 一 0．02世 pE[7一 Tris-HC1梯 度 洗 脫 ，流 速腹 水1分泌抗 ~-HCG單 克 隆 一計 (ShimadzuuV一24o)上讀 OD280，把 0
抗體雜交瘤移植于 BALB／c小鼠腹腔 的 滲 值太子 0．1者 ，臺并，即為 DEAE 純化物。
出液 ，抗體球蛋 白類 型為 IgG 。 ， 三 ，抗體 純 窿的鑒 定 ；(- ~ELISA法 t
二、DEAE-22柱I2x25emo … 。。 在聚輦 乙烯塑料 小 杯 條 上 ，每 孔 加 i00
三 、正 辛酸 ：上海 化荊 商店 。 H．CG．溶液 (1~glm1)，置 4~C，24小 時 ，以洗
四、聚 苯乙烯 8聯(lián)小杯 條 ：美 國 ：Dyne- 滌液 (0．02M Tris-HC1pH7．4)洗滌三 次 ，
tech公 司產(chǎn) 品。 ． ． 吸 干。將 =種純化 物與原 腹水分別 校正濃度
五、免抗 鼠 IgG 辣根過 氧化 物 酶 標(biāo) 記 至 ]lJg／ml，然 后撬 比稀 釋 ，在每 孔蜘 100／~1，
物：實驗 室 自制 。 置 37。C2小時 ，同液洗滌三 次 ，吸干 ，每孔船
， ． ． 兔 抗 鼠 IgG-酶標(biāo) 記物 溶液 100 ，置 37~0，
／J 1． 5小 時 ，洗 滌 三 次 (同 上 )，吸 干 ，各 孔船、 正辛酸純化 法。3D，。腹永 2ml，加 入 新鮮酉己制的鄰苯 =胺一過 氧化 氫底 物 溶 液
4m10．06M pH4醋酸緩 沖 液 ，校 正 pH 至 100／．~1，置 37'015分鐘 ，加 2M Ⅱ SO 100
4．8，在 振蕩下滴加 正 辛酸 60 ，室溫 中混和 終止反應(yīng) ，在簿標(biāo) 比色計 (Dynatech)上 讀取
30分鐘 ，離心 (4，O00i'pm ，30分 鐘 50)，取 OD值 。
一 }二層 液 ，對 50倍體 積 pH7一 PB (137raM (= > 電泳 l
NaG1， 2．6mM lKG】， 10mM KH，PO4 1．醋 酸 纖 維 索 薄 膜 電 泳：正 辛 酸
NaⅡPo．，0．2mM EDTA)在 4。G攪拌 透析 DEAE--22純 化物分別 以 2p,l(2mg／m1)，原
6小時，中間更換透析液 2次，然后加入等休 腹水 l 加樣于醋酸纖維索薄膜，電泳液：‰
積 的飽和硫酸 銨溶液 ，elisa試劑盒白介素類置 4。030分 鐘 ，離心 — —
(4，O00rpm 20分鐘 )取 沉淀 ，加 2ml上述PB ·