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PCR试验交流
点击次数：5622 发布时间：2011-6-16
你会读marker吗？
zui近在做PCR试验，发现要了解的东西太多了，很多非?；〉某Ｊ缎缘闹抖己苋菀壮鑫侍?，zui近就出现电泳图中的Marker问题，一起做试验的前辈教我从zui后一条开始数，zui后一条为11，代表72bp，前面再类推。按此方法比较一直以为自己没跑出所需条带，降低条件反复跑。
然后坐下来总结经验，终于我认识到可能是Marker的阅读问题，并且在试验中我试着用不同的电泳时间看结果，发现有时候条带总共是10条，有时候是9条。我意识到按照zui后一条条带来定位是不准确的。并上网查看Marker说明，发现不同的Marker说明表格显示有的总共11条，有的总共13条。但是在对照图片上可以发现zui后的11号或13号甚至12号条带往往光有数据而不显示条带，这说明zui后1条条带甚至倒数第二条条带是很难显示的。有时它们在同一个条带上标记两个数据，这是因为如果电泳时间或胶的浓度影响，有时无法分辨为两条。因此，我可以确信，用Marker比较一定要从起始端开始数，而不能根据zui末一个条带来定位。拿到足够的证据，同已经做了1年多试验，就要发表文章的前辈讨论，但他仍然坚持自己的看法，说是老师教他的。终于我将这个情况跟技术员及老板讨论，zui终获得认同。这样看来，这个问题也不简单。
另外补充几条：
1、是应该从大条带端开始数，原因有二：
小条带跑得快，时间长了可能会跑出胶，所以电泳时要注意好时间；
在电泳过程中EB是向阴运动，所以跑到凝胶下缘的条带染色很弱甚至不染色，也会看不到！必要时建议灌制长胶。
2、marker中的小条带分子量较小，跑的时间长了容易弥散而导致看不清楚
3、同意上面的说法，zui近也在跑电泳，我每次也是从zui下面数的，上面的条带有时候颜色很浅看不出来！
4、另外还有一些商用Marker，有一个条带亮度超过其他条带（比如为其他的两倍），比较容易分辨，也可以帮助定位！