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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司

ELISA試劑盒的運(yùn)輸工作

時(shí)間:2017-2-13閱讀:1070

ELISA試劑盒的運(yùn)輸工作
1.簡單,不需要復(fù)雜而昂貴的儀器(如電洗脫儀)。
2.適用于變性膠(SDS-PAGE)和非變性膠。
3.回收率一般在50-90%之間(跟蛋白質(zhì)大小,洗脫時(shí)間相關(guān))。
4.跟后續(xù)的實(shí)驗(yàn)兼容,包括2-D電泳、質(zhì)譜測序等。
運(yùn)輸及保存    常溫運(yùn)輸,4℃保存,有效期一年。
自備試劑      無
ELISA試劑盒使用方法      
1. 按常規(guī)方法進(jìn)行變性(SDS-PAGE)或非變性蛋白電泳。
2. 切取含目的蛋白的膠(盡可能地把多余的膠切除,否則會影響回收效率)。注意:固定和染色后蛋白回收效果很差,所以建議把樣品分多孔上樣,電泳后只切其中一個(gè)樣孔的膠條進(jìn)行固定和染色,然后將此膠條放回到在整體膠中原來的位置,通過顯色膠條上的蛋白條帶找到在未染色膠上對應(yīng)區(qū)域,并切下此區(qū)域的膠進(jìn)行回收。
3.將切下的膠塊轉(zhuǎn)移到1.5 mL塑料離心管中。
4.用研磨杵充分將膠塊壓磨成盡可能細(xì)小的碎片。
5.加入200 uL溶液A,4℃搖晃洗脫至少2-16小時(shí)(夜)。此時(shí)將溶液B放在冰箱預(yù)冷。
6.10,000 g離心10分鐘,轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中,注意不要吸取碎膠。
7.加入5倍體積的預(yù)冷的溶液B,搖晃混勻。
8.-20℃放置至少10-30分鐘。
9.室溫12,000 g離心5-20分鐘,棄上清。
10.
ELISA試劑盒室溫充分晾干,得到的沉淀即為回收的蛋白質(zhì)?;厥盏牡鞍踪|(zhì)可溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)(2-D電泳、質(zhì)譜測序等)。

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