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IgG存在下泊洛沙姆188的LC/MS分析 (ODP2 HP-2B)
有时会在抗体药物中添加少量表面活性剂以防止IgG聚集和吸附，表面活性剂的浓度控制对于质量管理非常重要。以下是使用聚合物基质反相色谱柱ODP2 HP-4D，不进行前处理，在存在下使用蒸发光散射检测器(ELSD)分析泊洛沙姆188的应用实例。在碱性条件下，IgG不会在色谱柱中保留，随着保留体积一起被色谱柱洗脱，泊洛沙姆188根据反相模式被色谱柱保留。因此，把IgG洗脱3分钟后的洗脱液导入MS系统，无需进行除蛋白预处理即可不受IgG的离子抑制的影响分析泊洛沙姆188。泊洛沙姆188是一种具有分子量分布的多成分表面活性剂，通过SIM模式分析其中一种成分，选择性高，定量性好。使用泊洛沙姆188峰面积创建校正曲线时，在10至100 μg/mL的范围内可获得高线性。 在样品浓度为50 μg/mL时的加标回收率也能达到96%。
Sample : 2 μL
Poloxamer 188 50 μg/mL + Polyclonal IgG (from human serum) 10 mg/mL (in H2O)
Sample : 2 μL
Poloxamer 188 50 μg/mL + Polyclonal IgG (from human serum) 10 mg/mL (in H2O)
Column : Shodex ODP2 HP-2B (2.0 mm I.D. x 50 mm)
Eluent : (A); 0.1 % NH3 aq./(B); CH3CN
High pressure linear gradient;
(B %) 20 % to 90 % (0 to 5 min), 90 % (5 to 6 min),
90 to 20 % (6 to 6.1 min), 20 % (6.1 to 8 min)
Flow rate : 0.2 mL/min
Detector : UV (280 nm), ESI-MS (SIM Positive)
Column temp. : 40 ℃