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ELISA中陰性本底的形成原因和消除方法

時(shí)間:2014-12-26閱讀:2757
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ELISA中陰性本底的形成原因和消除方法

在酶聯(lián)固相免疫實(shí)驗(yàn)中,尤其在間接ELISA法中,經(jīng)常會(huì)碰到陰性本底的問(wèn)題。主要是本底過(guò)高和不同標(biāo)本的本底值差異較大。本底或稱(chēng)背景,是ELISA中的非特異性顯色。底物未經(jīng)過(guò)酶作用而呈現(xiàn)的顏色稱(chēng)為空白。底物液如配制不當(dāng)會(huì)出現(xiàn)一定的空白值。這個(gè)空白值只要不太高(A<0.05),可從各測(cè)定值中減除,并不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。這里討論的是不含待測(cè)抗原或抗體的陰性標(biāo)本在ELISA中出現(xiàn)的本底。從理論上來(lái)說(shuō),只有陰性標(biāo)本zui終才能引起顯色反應(yīng),那么,為什么會(huì)出現(xiàn)本底呢?

  固相載體的吸附:在酶免疫測(cè)定中,ELISA的特點(diǎn)是利用分離游離和結(jié)合的酶結(jié)合物的手段。固相載體與吸附在其上的抗原或抗體形成固相抗原或固相抗體,即免疫吸附劑(Immu-nosorbent)。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團(tuán),通過(guò)疏水鍵與蛋白質(zhì)結(jié)合。這種物理性吸附是非特異性的,雖然蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等對(duì)吸附的量有一定的影響,但總的來(lái)說(shuō)各種蛋白質(zhì)均能吸附在聚苯乙烯載體的表面。因此除在包被時(shí)有目的地使抗原或抗體吸附在載體上外,在ELISA各個(gè)步驟中均有可能發(fā)生干擾物質(zhì)的吸附,使zui終產(chǎn)生與受檢抗原-抗體反應(yīng)無(wú)關(guān)的顯色,這是形成本底的主要原因。

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