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抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）測(cè)試盒 維生素C

貨號(hào)：BC0220

規(guī)格：50管/48樣

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

    APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過(guò)氧化物和乙醛酸體，以及過(guò)氧化體和類囊體膜上。APX 催化H₂O₂ 氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影響到AsA 的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與AsA 具有一定的負(fù)相關(guān)性。

    APX催化H₂O₂氧化AsA，通過(guò)測(cè)定AsA 的氧化速率，可計(jì)算得APX 活力。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

    低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL石英比色皿、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5mL雙蒸水充分溶解；

試劑三：液體×1支，4℃保存。

操作步驟：

一、粗酶液提取 ：   

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定操作表：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到290 nm，用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一在25℃中預(yù)熱30min以上。

3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、700μL預(yù)熱的試劑一、100μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后在290nm測(cè)定10 s和130 s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。

4. 測(cè)定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、700μL預(yù)熱的試劑一、100μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后在290nm測(cè)定10 s和130 s光吸收A3和A4，△A測(cè)定管=A3-A4。

APX活力計(jì)算：

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。

APX(U/mg prot) = (△A測(cè)定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×10⁶÷(Cpr×V樣)÷T

=1.79×(△A測(cè)定管-△A空白管) ÷ Cpr

ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數(shù)為2.8×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），100μL=0.1 mL；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。

APX(U/g ) = (△A測(cè)定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×10⁶÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1.79×(△A測(cè)定管-△A空白管) ÷W

ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數(shù)為2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），100μL=0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。

抗壞血酸過(guò)氧化物酶（APX）測(cè)試盒 維生素C