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過氧化氫酶（CAT）檢測試劑盒 抗逆系列

產(chǎn)品簡介 ：
    CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是主要的 H 2 O 2 清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。
    H2O2在 240nm下有特征吸收峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反應溶液 240nm 下的吸光度隨反應時間而下降，根據(jù)吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。

試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

產(chǎn)品內(nèi)容 ：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：100 uL×3 瓶，4℃保存。

操作步驟 ：
一 、 粗酶液提取 ：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備
    收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 200 萬細菌或細胞加入 400µL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率 20%，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。
    稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。

二 、CAT  測定操作
    1、CAT 檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二（100 uL）中加入 20mL 試劑一，充分混勻，作為工作液。
    2、測定前將 CAT 檢測工作液 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴 10min。
    3、取 1mLCAT 檢測工作液于 1mL 石英比色皿中，再加入 35µL 粗酶液，混勻；室溫下立即測定 240nm 下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算 ?A=A1-A2

三 、CAT  活性計算 ：
1、血清（漿）CAT 活力的計算:
    單位的定義：每升血清（漿）在反應體系中每分鐘催化 1umol H 2 O 2 降解定義為一個酶活力單位。
    CAT（U/L）＝反應總體積（1035ul）÷樣本體積（35ul）÷反應時間（1min）÷H 2 O 2 消光系數(shù)（43.6×10 -3 ）×?A=678×?A
2、組織 CAT 活力計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
    單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H 2 O 2 降解定義為一個酶活力單位。
    CAT（U/mg prot）＝反應總體積（1035ul）÷樣本體積（35ul）÷反應時間（1min）÷H 2 O 2 消光系數(shù)（43.6×10 -3 ）×?A÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）=678×?A÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）
（2）按樣本鮮重計算：
    單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmol H 2 O 2 降解定義為一個酶活力單位。
    CAT （U/g mass） ＝反應總體積 （1035ul） ÷樣本體積 （35ul） ÷反應時間 （1min） ÷H 2 O 2 消光系數(shù) （43.6×10 -3 ）×A÷樣本鮮重（g/mL）=678×?A÷樣本鮮重（g/mL）
3、細菌或細胞中 CAT 活力計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
    單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H 2 O 2 降解定義為一個酶活力單位。
    CAT（U/mg prot）＝反應總體積（1035ul）÷樣本體積（35ul）÷反應時間（1min）÷H 2 O 2 消光系數(shù)（43.6×10 -3 ）×?A÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）=678×?A÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）
3.2 按細菌或細胞密度計算：
   單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘催化 1nmol H 2 O 2 降解定義為一個酶活力單位。
   CAT（U/10 4 cell）＝反應總體積（1035ul）÷樣本體積（35ul）÷反應時間（1min）÷H 2 O 2 消光系數(shù)
   （43.6×10 -3 ）×?A÷細胞密度（10 4 cell /mL）=678×?A÷細胞密度（10 4 cell /mL）

過氧化氫酶（CAT）檢測試劑盒 抗逆系列