可溶性淀粉合成酶（SSS）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1850
规格：25T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前取1瓶试剂二A加入8mL试剂一，缓慢加热，逐渐升温使其溶解，冷却后加入试剂二B和试剂二C混合溶解，这样可以分两批配制并且测定，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。

2. 试剂三：临用前试剂三B加入试剂三A溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

3. 试剂四：临用前先离心，取7 μL试剂四加入2.24 mL溶解好的试剂三混合备用（约14T），现用现配，也可根据样本量按比例配制。

4. 试剂五：临用前取试剂五B和试剂五C加入试剂五A溶解备用，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融。

5. 试剂六：临用前取1支加入208 μL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2周，避免反复冻融。

6. 试剂七：临用前加入2mL蒸馏水，用不完的试剂-20℃分装保存8周，避免反复冻融。

产品说明：
SSS（EC 2.4.1.21）通常以游离态存在于质体基质中，催化淀粉链延长，主要负责支链淀粉的合成。
SSS催化ADPG与淀粉引物（葡聚糖）反应，将葡萄糖分子转移到淀粉引物上，同时生成ADP，在反应体系中添加的丙 酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP⁺还原为NADPH，NADPH生成量与前一步反应中ADP生成量呈正比，340nm下测定NADPH增加量即可计算SSS活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
粗酶液制备：称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤

1. 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定：在EP管内按顺序加入

混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A₁和2min后的吸光度A₂，计算ΔA=A₂-A₁。
注意：试剂二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混匀。
三、SSS活性计算
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(Cpr×V样本÷V反总×V上清) ÷T=43.2×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。
2、按照样本质量计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
SSS活性（U/g 质量）=[ΔA÷（ε×d）×V测]÷(W÷V提取×V样本÷V反总×V上清) ÷T=43.2×ΔA÷W
V测：测量体积，0.78mL；V反总：反应体积，0.62mL；V提?。杭尤胩崛∫禾寤?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif">1mL；T：反应时间，20min；ε：NADPH消光系数，6.22×10^-3mL/(nmol_˙cm)；d：石英比色皿光径，1cm；V样本：加入样本的量，0.2mL；V上清：吸取上清液的量，0.45mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
实验实例：

1. 取约0.1g肝脏加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10分钟，取上清置冰上待测。之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A₂-A₁=0.394-0.211=0.183，按样本质量计算酶活得：SSS活性（U/g 质量）=43.2×ΔA÷W=79.056 U/g 质量。

2. 取约0.1g冬青加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g，4℃离心10分钟，取上清置冰上待测。之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A₂-A₁=1.31-1.303=0.007，按样本质量计算酶活得：SSS活性（U/g 质量）=43.2×ΔA÷W=3.024 U/g 质量。

参考文献：

1. Jiang H, Dian W, Wu P. Effect of high temperature on fine structure of amylopectin in rice endosperm by reducing the activity of the starch branching enzyme[J]. Phytochemistry, 2003, 63(1): 53-59.

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