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花青素还原酶（ANR）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
货号：BC4090
规格：50T/24S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 提取液：内含不溶物，使用前摇匀。

2. 试剂二：临用前加入3 mL蒸馏水备用。-20℃可分装保存4周，避免反复冻融。

3. 试剂三：粉剂置于试剂瓶内玻璃管中。临用前加入1 mL乙醇和1 mL蒸馏水混匀溶解备用。可以分装后-20℃保存4周，避免反复冻融。

产品说明：
花青素还原酶（ANR）是原花青素生物合成途径中的关键酶，使花色素转变为相应的顺式黄烷-3-醇，在植物体内起着非常重要的调控作用。
NADPH在ANR作用下将花色素转化为黄烷-3-醇和NADP，在340nm下测定NADPH的减少速率，即可反映ANR活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：具体操作步骤请查阅产品资料附件

注意事项：

1. 当ΔA大于0.4或者A对照管大于1时，建议将反应混合液用试剂一稀释更大倍数或者减少加入的样本体积进行测定；ΔA过小时，可以增加酶促反应时间（45min或60min）或增加加入的样本体积来测定。

2. 加入试剂四后，请在15min内测定完成。

3. 样本蛋白浓度另行测定。

实验实例：

1. 取0.1g苹果加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，测得计算ΔA=A对照管-A测定管=0.922-0.813=0.109，按样本质量计算酶活得：ANR酶活（U/g质量）=107.18×ΔA÷W=107.18×0.109÷0.1=116.83 U/g 质量。

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