目录:北京索莱宝科技有限公司>>生化检测试剂盒-微量法>>微量法生化试剂盒>> BC2555-100T/48Sα-葡萄糖苷酶活性检测试剂盒 微量法
| CAS | 详询 | 纯度 | 详询 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 详询 | 分子式 | 详询 |
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100T/48S |
| 货号 | BC2555 | 应用领域 | 环保,化工,生物产业,农林牧渔,综合 |
| 主要用途 | 测定意义：α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细 |
α-葡萄糖苷酶（α-GC）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2555
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 粉剂×2瓶 | -20℃保存 |
| 试剂二 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 液体15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 标准品 | 液体1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、试剂一：临用前取1瓶加入6 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂建议-20℃分装保存4周，避免反复冻融；
2、标准品：5 μmol/mL的对*溶液。
产品说明：
α-GC(EC 3.2.1.20)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化水解芳基或烃基与糖基之间的α-糖苷键生成葡萄糖，不仅与细胞壁的松弛或加固有关，而且与细胞识别和一些信号分子产生密切相关。
α-GC分解对-硝 基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-*，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算α-GC活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：称取约0.2g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。
3、液体样本：直接检测。若溶液有浑浊需离心后取上清进行测定。
二、测定步骤
分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至400nm，分光光度计蒸馏水调零。
标准溶液的稀释：将5μmol/mL的标准液用蒸馏水稀释成100、50、25、12.5、6.25、0 nmol/mL标准溶液待测。
标准液稀释可参考下表：
| 序号 | 稀释前浓度（nmol/mL） | 标准液体积（µL） | 蒸馏水体积（µL） | 稀释后浓度（nmol/mL） |
| 1 | 5000 | 100 | 400 | 1000 |
| 2 | 1000 | 200 | 1800 | 100 |
| 3 | 100 | 1000 | 1000 | 50 |
| 4 | 50 | 1000 | 1000 | 25 |
| 5 | 25 | 1000 | 1000 | 12.5 |
| 6 | 12.5 | 1000 | 1000 | 6.25 |
| 7 | 6.25 | 0 | 1000 | 0（空白管） |
备注：实验中每个标准管需70µL标准溶液。
加样表
| 试剂名称（μL） | 测定管 | 对照管 | 标准管 | ||||||
| 试剂一 | 100 | ||||||||
| 试剂二 | 150 | 150 | |||||||
| 样本 | 30 | 30 | |||||||
| 充分混匀，放入37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） | |||||||||
| 试剂一 | 100 | ||||||||
| 充分混匀，8000g，4℃，离心5min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列试剂） | |||||||||
| 上清液 | 70 | 70 | |||||||
| 标准液 | 70 | ||||||||
| 试剂三 | 130 | 130 | 130 | ||||||
| 充分混匀，室温静置2min后，于400nm处测定吸光值A，分别记为A测定管、A对照管、A标准管、A空白管。计算ΔA测定=A测定管-A对照管。ΔA标准=A标准管-A空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2次。 | |||||||||
参考文献：
[1] Wang S Y, Camp M J, Ehlenfeldt M K. Antioxidant capacity and α-glucosidase inhibitory activity in peel and flesh of blueberry (Vaccinium spp.) cult ivars[J]. Food Chemistry, 2012, 132(4): 1759-1768.
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