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羟自由基清
除能力检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC1325
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂四：试剂放于试剂瓶内EP管中。临用前加入9.84 mL蒸馏水混匀，也可按比例现用现配，配好的试剂2-8℃保存4周。

产品说明：
羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。羟自由基清除能力是样本抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H₂O₂/Fe²⁺通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe²⁺水溶液中Fe²⁺氧化为Fe³⁺，导致536nm的吸光度下降，样本536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样本清除羟自由基的能力。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
注意事项:

1. 为了比较不同样本羟自由基清除能力，对于同一批样本必须加入等量的样本，血清、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。

2. 样本过多时，可以按体积比试剂一：试剂二：试剂三=0.05：0.1：0.1的比例配制工作液，现用现配。

实验实例：

1. 取0.1g脾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算：羟自由基清除率D%=（A测-A对）÷（A空-A对）×100%=(0.77-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=82.78%。

2. 取0.1g稗草叶加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算：羟自由基清除率D%=（A测-A对）÷（A空-A对）×100%=(0.698-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=71.9%。

3. 取兔血清后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算：羟自由基清除率D%=（A测-A对）÷（A空-A对）×100%=(0.553-0.222)÷(0.884-0.222)×100%=50%。

相关发表文献：

1. Hu J, Wang Q, Wang Y, et al. Polydopamine-Based Surface Modification of Hemoglobin Particles for Stability Enhancement of Oxygen Carriers[J]. Journal of Colloid and Interface Science, 2020.

2. Liang R, Zhao J, Li B, et al. Implantable and degradable antioxidant poly (ε-caprolactone)-lignin nanofiber membrane for effective osteoarthritis treatment[J]. Biomaterials, 2020, 230: 119601.

3. Yang Y, Liu M, Wang K, et al. Chemical and cytological evaluation of honeybee pollen antioxidant ability[J]. Journal of Food Science, 2020, 85(3): 824-833.

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