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谷丙转氨酶（GPT/ALT）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC1555
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂一：提供1个8 mL棕瓶；临用前取1支试剂一倒入空瓶中，用2 mL蒸馏水溶解，再用溶液将试剂一残留试剂润洗下来；该试剂为冻干试剂，可能存在肉眼观察试剂量相差较大甚至量很少的现象，此现象不影响使用，实际质量相同；

2. 标准液：20 μmol/mL丙 酮酸钠。

产品说明：
谷丙转氨酶又叫丙*酸氨基转移酶（EC 2.6.1.2），GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。
GPT催化丙*酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙 酮酸和谷*酸；加入2,4*溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙 酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。


注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料"附件
实验实例：

1. 取0.1g兔子肝脏组织加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清后再按照测定步骤操作，用96孔板测得A测定管=0.701，A对照管=0.271，计算?A=A测定管-A对照管=0.701-0.271=0.430，带入标准曲线y=0.2796x+0.0476，计算x=（0.430-0.0476）÷0.2796=1.368，按样本质量计算酶活得：

GPT活性（U/g质量）=12x÷W=12×1.368÷0.1=164.16 U/g质量。

1. 取兔血清直接检测，使用96孔板测得A测定管=0.307，A对照管=0.247，计算?A=A测定管-A对照管=0.307-0.247=0.06，带入标准曲线y=0.2796x+0.0476，计算x=（0.06-0.0476）÷0.2796=0.044，按血清（浆）体积计算酶活得：

GPT活性（U/mL）=12x=12×0.044=0.528 U/mL。
相关发表文献：

1. Yong Li, Fengjun Cao, Mingxing Li,et al. Hydroxychloroquine induced lung cancer suppression by enhancing chemo-sensitization and promoting the transition of M2-TAMs to M1-like macrophages. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. October 2018;(IF5.646)

2. Poopal R K, Zhang J, Zhao R, et al. Biochemical and behavior effects induced by diheptyl phthalate (DHpP) and Diisodecyl phthalate (DIDP) exposed to zebrafish[J]. Chemosphere, 2020: 126498.

参考文献：

1. Zhao W, Wei H. Effects of cadmium on transaminase activities and structures of tissues in freshwater giant prawn (Macrobrachium rosenbergii) [J]. Journal of Fisheries of China, 1995,19(001):21-27.

2. Ohgami N, Upadhyay S, Kabata A, et al. Determination of the activities of glutamic oxaloacetic transaminase and glutamic pyruvic transaminase in a microfluidic system[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2007, 22(7): 1330-1336.

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