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當前位置：首頁 >> 資料下載 >> Y12662A雞促卵泡素（FSH）ELISA試劑盒使用說明書

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教學耗材試劑盒: 特色試劑盒

生物試劑: 化學試劑標準品對照品其他生化試劑抗體類測試盒類培養(yǎng)基類緩沖劑類表面活性劑分離材料及耗材維生素類色素類碳水化合物類植物激素及核酸類抗生素類蛋白質類酶類氨基酸

低溫恒溫槽: DF-101S型集熱式磁力攪拌器高溫恒溫油浴高溫循環(huán)器低溫恒溫循環(huán)器高精度恒溫水槽.恒溫油槽高精度低溫恒溫槽低溫冷卻液循環(huán)泵（機）恒溫液循環(huán)泵（機）超級恒溫水槽.恒溫油槽低溫恒溫槽

制冰機: 層析冷柜雪花制冰機

超聲波清洗機: 超聲波細胞粉碎機超聲波清洗機

對照品: 生化試劑

糖度計，折光儀: 糖度計，折光儀，折射儀

旋轉蒸發(fā)器: 旋轉蒸發(fā)器RE-52A

干燥箱: 真空干燥箱紅外線快速干燥箱

試劑盒: ELISA試劑盒

耗材設備: 硅膠板

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Y12662A雞促卵泡素（FSH）ELISA試劑盒使用說明書

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本公司專業(yè)供應Elisa試劑盒，種屬齊全，現(xiàn)貨，質量有保證。
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雞促卵泡素（FSH）ELISA試劑盒使用說明書

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞促卵泡素（ FSH）水平。用純化的雞促卵泡素（FSH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促卵泡素（ FSH），再與 HRP標記的 FSH抗體結合，形成抗體 -抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的促卵泡素（ FSH）呈正相關。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），通過標準曲線計算樣品中雞促卵泡素（ FSH）濃度。
試劑盒組成：

試劑盒組成	48孔配置	96孔配置	保存
說明書	1份	1份
封板膜	2片（48）	2片（96）
密封袋	1個	1個
酶標包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
標準品：1350ng/L	0.5ml×1瓶	0.5ml×1瓶	2-8℃保存
標準品稀釋液	1.5ml×1瓶	1.5ml×1瓶	2-8℃保存
酶標試劑	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
樣品稀釋液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
終止液	3ml×1瓶	6ml×1瓶	2-8℃保存
濃縮洗滌液	（20ml×20倍）×1瓶	（20ml×30倍）×1瓶	2-8℃保存

樣本處理及要求：

1.血清：室溫血液自然凝固 10-20分鐘，離心 20分鐘左右（ 2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。

2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20分鐘后，離心 20分鐘左右（ 2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3.尿液：用無菌管收集，離心 20分鐘左右（ 2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20分鐘左右（ 2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞

濃度達到 100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20℃保存，但應避免反復凍融 .

7. 不能檢測含 NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10孔，在*、第二孔中分別加標準品 100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取 100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl棄掉，再各取 50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl，混勻后從第九第十孔中各取 50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl，濃度分別為 9IU/L，6IU/L，3IU/L，1.5IU/L， 0.75IU/L）。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

4.配液：將 30（48T的 20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T的 20倍）倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應在加終止液后 15分鐘以內進行。

注意事項：

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準 .

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。 10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

計算：以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

（此圖僅供參考）

試劑盒性能：

1. 樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù) R值為 0.95以上。

2. 批內與批見應分別小于 9%和 11%

檢測范圍：

0.5IU/L -10IU/L

保存條件及有效期：

1 2-8℃。

2 6個月

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