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IL-8的诱生与IL—8的免疫学检测
阅读：535 发布时间：2012-5-12IL-8由单核／巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞和内皮细胞等多种细胞产生，其主要生物活性是激活中性粒细胞。
多用人外周血或脐带血单个核细胞，也可用体外培养传代细胞系。LPS、PHA、ConA、IL-i、TNFa均是较理想的刺激剂。
1．常规分离PBMC，洗涤后，调整细胞浓度为5X106／mL。
2．加入终浓度为1ug／mL的LPS及10mg／mL的PI-IA，混匀后置37％，5％C02温箱中培养48h，离心收集上清。
3．用HCl将培养上清调为酸性（pI-14．0），经SephadexG-75柱分离，收集活性组分即为IL-8粗制品。
免疫学检测法
1．双抗体夹心法ELISA 同常规夹心法ELISA。
2．原位免疫细胞化学测定法 该法用于测定细胞浆内IL-8含量。首先将待测细胞（如皮肤成纤维细胞）培养于平皿中的盖玻片上，加入适当的刺激剂（如IOOU／mL的hlL-1。），共孵育一定时间；将载玻片取出，空气干燥后在丙酮中固定10min；将盖玻片粘附于载玻片上，加入适当浓度的抗IL-8McAb，室温反应30rain，冲洗后加入酶标的第二抗体，冲洗后加底物显色，显微镜下观察。